<<
>>

4.2.2. Определение продукции супероксидного анион-радикала

Содержание супероксидного анион-радикала определяли по накоплению адренохрома, продукта взаимодействия супероксида с эпинефрином (адреналином) по методике [79] в нашей модификации. Навеску растительного материала (1,5 г) растирали в фарфоровой ступке с трис-НС1 буфером (рН 7,8) в соотношении 1 : 4, фильтровали через несколько слоев марли и центрифугировали (15 мин, 8000 об/мин).
Содержание супероксидного анион-радикала в ряде опытов определяли в полученном гомогенате. В других опытах использовали выделенные и очищенные фракции митохондрий, хлоропластов или цитоплазму. Для определения супероксидного анион-радикала в кювету вносили 0,6 мл 1 мМ адреналина и 0,1 мл исследуемой фракции. Через 15 мин экспозиции в темноте реакцию останавливали внесением 50 мкл 0,05 М НС1. Оптическую плотность растворов измеряли на спектрофотометре СФ-56 (“ЛОМО”, Россия) при длине волны 480 нм. Содержание супероксидного анион­радикала рассчитывали с учетом коэффициента экстинкции s = 4020 М -1 ■ см -1

Использование данного метода для определения супероксидного анион-радикала было подтверждено в предварительных опытах с помощью

ингибирования реакции его образования в присутствии фермента супероксиддисмутазы. Было показано, что при внесении 70 или 170 единиц фермента СОД («Sigma», США) в пробу, содержащую адреналин и 0,1 мл растительной фракции, продукция супероксидного анион-радикала блокировалась на 80-95 % (рис. 2).

Рис. 2. Влияние СОД на продукцию супероксидного анион-радикала в модельном опыте.

1 - содержание супероксида без СОД; 2 - содержание супероксида в присутствии 70 ед. СОД; 3 - содержание супероксида в присутствии 170 ед. СОД


<< | >>
Источник: Бердникова Ольга Сергеевна. ВОЗДЕЙСТВИЕ ГИПОКСИИ И СРЕДЫ ВЫСОКИХ КОНЦЕНТРАЦИЙ СО2 НА ОБРАЗОВАНИЕ АКТИВНЫХ ФОРМ КИСЛОРОДА В КЛЕТКАХ РАЗЛИЧНЫХ ПО УСТОЙЧИВОСТИ РАСТЕНИЙ. 2016

Еще по теме 4.2.2. Определение продукции супероксидного анион-радикала:

  1. Определения содержания нитратов в растительной продукции.
  2. К МЕТОДИКЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛИНЕЙНОГО ПРИРОСТА И ПРОДУКЦИИ СФАГНОВЫХ МХОВ НА МЕЗО-ОЛИГОТРОФНЫХБОЛОТАХ ЗАПАДНОЙ СИБИРИ
  3. Первичная продукция. 
  4. Продукция биомассы
  5. Продукция
  6. ЗАПАСЫ И ПРОДУКЦИЯ ДРЕВЕСНОГО ЯРУСАКИРСАНОВСКОГО БОЛОТА Е. А. Головацкая, М. В. Волознева, Е. В. Порохина
  7. Размеры заготовок и продукция сайгачьего промысла
  8. Состав пчелиной семьи и ее продукция
  9. Растительные токсины, влияющие на технологические свойства и биологическую ценность животноводческой продукции
  10. О влиянии свойств почв и удобрений на качество растительной продукции.
  11. Технология производства и объем выпуска продукции. Отходы производства и их влияние на основные компоненты биогеоценоза
  12. Влияние доз и времени внесения калия в условиях аммиачного и нитратного питания растений на их урожай и качество продукции
  13.   Определение витамина Е в сыворотке крови (см. с. 195). Определение церулоплазмина в сыворотке крови.  
  14. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОДУКТОВ ПЕРЕКИСНОГО (СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО) ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ  
  15. 4.9. Определение белкового азота
  16.   Определение восстановленного глутатиона в крови.  
  17. 1.5. Определение суммы поглощённых оснований по Каппену- Гильковицу