<<
>>

  КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ НИТРАТОВ И НИТРИТОВ (ПО Е. С. КОВАЛЕВОЙ, 1985)

 

Метод одобрен отделением ветеринарии ВАСХНИЛ, 1985. Принцип. Метод основан на измерении интенсивности окрашивания комплекса, образующегося при взаимодействии нитрита-иона с амидом сульфаниловой кислоты и 1Ч-(1-нафтил)-этилен- диаминдигидрохлоридом. Нитраты определяют путем их восстановления до нитритов с помощью губчатого кадмия, которые устанавливают проведением вышеназванной реакции с последующим пересчетом на нитрат. Предел обнаружения нитритов 0,2 мг/кг, нитратов — 0,4 мг/кг.

Реактивы: натрий азотнокислый; калия нитрат;

цинк металлический гранулированный; кадмия сульфат; кислота хлористоводородная; трилон Б; аммиак водный;

калий железисто-синеродистый (желтая кровяная соль); цинка ацетат;

кислота уксусная, ледяная; натрия тетраборат (бура); активированный уголь марки БАУ-А, ОУА; алюминия сульфат;

амид сульфаниловой кислоты (стрептоцид белый);

N-(1 -нафтил)-этилендиаминдигидрохлорид;

0,1 н.

раствор кислоты хлористоводородной; раствор кадмия сульфата. 37 г кадмия сульфата растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе на 1000 мл и доводят объем в колбе до метки;

буфер аммонийный, pH 9,6—9,7. 20 мл концентрированной кислоты хлористоводородной растворяют в 500 мл дистиллированной воды, перемешивают, добавляют 10 г трилона Б и 55 мл концентрированного аммиака, доводят объем в колбе до метки дистиллированной водой, перемешивают и проверяют pH;

насыщенный раствор буры. 50 г натрия тетрабората помещают в мерную колбу на 1000 мл, добавляют при тщательном перемешивании 500 мл воды и после растворения доводят объем в колбе до метки;

реактив Кареза I. 106 г калия железисто-синеродистого растворяют в колбе на 1000 мл и доводят объем до метки. Хранят не более 1 мес;

реактив Кареза II. 220 г цинка ацетата и 30 мл ледяной уксусной кислоты растворяют дистиллированной водой в мерной колбе на 1000 мл, доводят объем колбы до метки. Хранят не более 1 мес;

растворы для проведения цветной реакции: а) реактив I. 2 г амида сульфаниловой кислоты растворяют в 400—500 мл водного раствора кислоты хлористоводородной, приготовленной в соотношении 1:1, а затем доводят объем этой кислотой до 1000 мл; б) реактив II. 0,25 г 1Ч-(1-нафтил)-этилендиаминдигидрохлорида растворяют в 250 мл дистиллированной воды.

Приготовление губчатого кадмия. Гранулы цинка распределяют по дну кристаллизатора на расстоянии 3—4 мм друг от друга и заливают раствором кадмия сульфата. Через 3—4 ч осадок отделяют от цинка и помещают в стакан с водой, избегая его соприкосновения с воздухом. Затем его измельчают в гомогенизаторе в 0,1 н. растворе кислоты хлористоводородной, отмывая от пылевидных частиц, и хранят под слоем воды. Перед работой кадмий заливают на 1 сут 0,1 н. раствором кислоты хлористоводородной, промывают водой и заполняют им редукционную колонку, наполненную водой. Слой кадмия во время заполнения колонки периодически перемешивают стальной проволокой так, чтобы не оставалось пузырьков воздуха. Скорость потока жидкости через колонку не должна превышать 3 мл/мин.

Перед использованием редукционной колонки ее промывают 25 мл 0,1 н. раствором кислоты хлористоводородной, 50 мл аммонийного буферного раствора, разведенного водой в соотношении 1 : 9. Уровень жидкости в колонке должен быть выше уровня кадмия.

Проверяют восстановительную способность колонки, используя стандартный раствор калия нитрата. Процент открытия должен быть не ниже 90, в противном случае кадмий переносят в химический стакан и заливают на 1—2 сут 0,1 н. раствором кислоты хлористоводородной.

Оборудование: ФЭК-56 или другой аналогичный прибор с зеленым светофильтром; редукционная кадмиевая колонка (описание дано в разделе «Реактивы и растворы»); колбы стеклянные различной вместимости; цилиндры мерные.

Ход определения. Для приготовления стандартных растворов 1,465 г калия нитрата растворяют в 100 мл дистиллированной воды. 5 мл раствора помещают в мерную колбу на 1000 мл и доводят до метки водой. В 1 мл содержится 73,25 мкг калия нитрата. Раствор готовят в день проведения анализа из предварительно просушенного при 105 °С калия нитрата. Для приготовления раствора натрия нитрита 1 г натрия нитрата растворяют в небольшом объеме воды, количественно переносят в мерную колбу на 500 мл, доводят объем до метки и перемешивают. Для приготовления рабочего стандартного раствора 25 мл основного раствора переносят в мерную колбу на 1000 мл, доводят водой до метки и перемешивают. Для построения градуировочного графика из стандартного рабочего раствора готовят серию разведений. Для этого 2, 5 и 10 мл рабочего раствора переносят в мерные колбы на 100 мл и доводят до метки водой. Содержание в них натрия нитрата составит соответственно 1,0, 2,5 и 5,0 мкг/мл. Разведения готовят непосредственно перед построением градуировочного графика.

Построение градуировочного графика состоит в следующем. В первую мерную колбу на 100 мл вносят 10 мл воды, в остальные — по 10 мл стандартного раствора каждой концентрации. Затем в каждую колбу вносят по 50 мл дистиллированной воды, добавляют по 10 мл реактива I для проведения цветной реакции и оставляют стоять в темноте в течение 5 мин, после чего добавляют по 2 мл реактива II и снова выдерживают в темноте в течение 5 мин, доводя водой до метки, и перемешивают. В результате реакции образуется раствор красного цвета, интенсивность которого измеряют на ФЭКе с зеленым светофильтром в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм.

Подготовка пробы. 2—10 г измельченного на гомогенизаторе растительного материала или тщательно размолотого на лабораторной мельнице сухого материала помещают в мерную колбу на 200 мл, заливают 100-—150 мл дистиллированной воды, добавляют 5 мл насыщенного раствора буры и выдерживают в течение 1 ч при комнатной температуре, периодически перемешивая, или ставят на ночь в холодильник при температуре 0—2 °С. Затем в колбу добавляют по 2 мл реактивов Кареза I и II, доводят объем до метки дистиллированной водой, перемешивают, выдерживают в течение 10—15 мин и фильтруют через складчатый фильтр, предварительно промытый дистиллированной водой. При плохой фильтрации пробу можно центрифугировать. Если фильтрат имеет окраску, его дополнительно пропускают через фильтр с молотым активированным углем, предварительно промытым дистиллированной водой. В фильтрате определяют содержание нитратов и нитритов.

При определении нитритов 10—50 мл очищенного фильтрата помещают в колбу на 100 мл, доводят объем дистиллированной водой до 60—65 мл и проводят цветную реакцию, как при построении градуировочного графика, доводят объем дистиллированной водой до метки, перемешивают и колориметрируют по отношению к контрольной пробе.

При определении нитратов 10—50 мл фильтрата пропускают через колонку с губчатым кадмием, заливая в воронку вместе с водой 5 мл аммонийного буферного раствора. Элюат собирают в мерную колбу на 100 мл. Колонку несколько раз промывают дистиллированной водой, которую сливают в эту же колбу до объема 60—65 мл. Доводят объем в колбе до метки, перемешивают, отбирают на цветную реакцию 10—15 мл и далее поступают, как при построении калибровочного графика. Если оптическая плотность окрашенного комплекса превышает максимальные значения оптической плотности градуировочного графика, то цветную реакцию повторяют с меньшими объемами исследуемой воды или фильтрата.

Расчет содержания нитритов (*1, мг/кг) ведут по формуле

„ _ С-200- 100 1 тУ '

где С — содержание нитритов в 1 мл окрашенного раствора, найденное по градуировочному графику, мкг; т — масса пробы, г; V — объем фильтрата для цветной реакции, мл.

Содержание нитратов (*2gt; мг/кг) вычисляют по формуле

„ С. 200 ,100. 100 . 65 тн = с_200. 100 . 1 lt;е тУуУг              *              У{т

где У\ — объем фильтрата, пропущенного через колонку с кадмием, мл; ^ — объем фильтрата, взятый для цветной реакции, мл; 1,465 — коэффициент пересчета калия нитрита на калия нитрат.

Второй формулой пользуются в случае, если берут весь объем элюата.

Клиническое значение. Обнаружение в кормах нитратов на уровне, превышающем 2000 мг/кг корма, и нитритов выше 100 мг/кг дает основание предполагать, что заболевание и гибель животных связаны с отравлениями нитратами или нитритами. Однако окончательный диагноз можно поставить только после анализа клинических признаков интоксикации (нарушение координации движений, сильно выраженный цианоз слизистых оболочек), исследования крови на метгемоглобин и результатов патологоанатомического вскрытия (кровь окрашена в темно-шоколадный цвет, плохо свертывается, паренхиматозные органы кровенаполнены).

  1.  
<< | >>
Источник:   И. П. Кондрахин.   Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: Справочник — М.: Колос,. — 520 с.. 2004

Еще по теме   КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ НИТРАТОВ И НИТРИТОВ (ПО Е. С. КОВАЛЕВОЙ, 1985):

  1. Определения содержания нитратов в растительной продукции.
  2.     Определение нитритов в кормах, крови и патологическом материале с использованием реактива Грисса.  
  3. 2.3. Определение содержания нитратов в почве по Грандваль- Ляжу
  4.   Определение нитратов в кормах, крови, молоке и патологическом материале с использованием реактива Грисса.  
  5.   Ионометрический метод определения нитратного  
  6.   Определение активности а-амилазы в сыворотке крови, моче, дуоденальном содержимом амилоклассическим методом со стойким крахмальным субстратом (метод Каравея).  
  7.   МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНОВ  
  8.   МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СИНТЕТИЧЕСКИХ ПИРЕТРОИДОВ  
  9.   Определение алкалоццов методом ТСХ (по В. М. Серову, В. А. Волковой, 1979) 
  10.   МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКРОЭЛЕМЕНТОВ  
  11.   МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЛКАЛОИДОВ  
  12.   МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКОТОКСИНОВ  
  13.   МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИАНИДОВ  
  14. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ КЛАССОВ ЛИПИДОВ ХИМИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ  
  15. В.А.КОВДА. БИОГЕОХИМИЯ ПОЧВЕННОГО ПОКРОВА, 1985
  16.   Определение ФОП методами ГЖХ.  
  17.   МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАТРИЯ ХЛОРИДА В ПАТОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ (ПО А. Ф. БАШМУРИНУ, 1968)  
  18.   МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕРБИЦИДОВ ГРУППЫ 2,4-Д