<<
>>

  МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКРОЭЛЕМЕНТОВ  

  В целях оценки обеспеченности организма животных микроэлементами помимо анализа содержания их в кормах нередко прибегают к определению их количества в крови, молоке и других биологических субстратах.
Для определения марганца, цинка, железа и других микроэлементов используют химические, атомно-абсорбционные, полярографические и другие методы.
Определение кобальта в крови по методу С.
И. Гусева в модификации А. А. Титовой. Принцип. Метод основан на получении окрашенного комплекса кобальта с 2-(2-пиридилазо)-5-диэтилмета- аминофенолом (ПААФ) при pH 5, экстракции его хлороформом и измерении оптической плотности среды.
Для устранения влияния других микроэлементов, реагирующих с ПААФ, их окрашенные комплексы разрушают 5 моль/л раствором серной кислоты.
Реактивы: 20%-ный раствор натрия цитрата (х. ч.);
  1. моль/л раствор натрия ацетата трехводного (х. ч.). 408 г соли растворяют в бидистиллированной воде и доводят объем до 1 л;

0,3 моль/л раствор соляной кислоты. В мерную колбу на 1 л вносят 24 мл концентрированной соляной кислоты (плотность 1,19) и доливают до метки бидистиллированной водой;
0,05%-ный раствор ПААФ. 50 мг реактива растворяют в 100 мл 96%-ного этилового спирта;
азотная кислота концентрированная (х. ч.);
5 моль/л раствор серной кислоты. 266,3 мл серной кислоты (плотность 1,84) доводят бидистиллированной водой до 1 л;
хлороформ;
калибровочный раствор кобальта основной. 0,4034 г кобальта хлорида (С0СЛ2 • 6Н2О, х. ч.) растворяют в бидистиллированной воде, добавляют 5 мл концентрированной соляной кислоты и доводят объем бидистиллированной водой до 1 л. В 1 мл калибровочного раствора содержится 100 мкг кобальта;
рабочий калибровочный раствор кобальта. 1 мл основного калибровочного раствора разводят до 100 мл 0,3 моль/л раствором соляной кислоты. В 1 мл раствора содержится 1 мкг кобальта;
20%-ный раствор соляной кислоты. 48,2 мл соляной кислоты (плотность 1,19) доводят до 100 мл бидистиллированной водой.
Оборудование: фотоэлектроколориметр; фарфоровые тигли или чашки; сушильный шкаф; весы аналитические; электроплитка; муфельная печь; водяная баня; бюретка на 25 мл; пипетки измерительные на 0,2, 1, 5 и 10 мл.
Ход определения. В фарфоровый тигель (или чашку) вносят 20 мл цельной крови, ставят на электроплитку и медленно обугливают. Далее озоляют в муфельной печи в течение 4 ч при температуре 500—550 °С. В теплый тигель приливают 2 мл 50%-ной азотной кислоты, тщательно перемешивают стеклянной палочкой, смывая приставшие к ней частицы бидистиллированной водой в тигель. Упаривают досуха на электроплитке или водяной бане, не допуская разбрызгивания содержимого. Тигель ставят в муфельную печь, доводят температуру до 500 °С и выдерживают в течение
  1. ч. При наличии частичек угля обработку азотной кислотой повторяют. К золе приливают 2,5 мл 20%-ного раствора соляной кислоты и 5 мл бидистиллированной воды. Тигель накрывают часовым стеклом, ставят в водяную баню и кипятят 5 мин. Содержимое тигля фильтруют в мерную колбу на 25 мл.
    Тигель обмывают несколько раз бидистиллированной водой и объем доводят до метки.

В делительную воронку или пробирку с притертой пробкой на 45—50 мл вносят 10 мл раствора золы, 2,5 мл 20%-ного раствора натрия цитрата, 2,5 мл 3 моль/л раствора натрия ацетата, 1 мл раствора ПААФ. Тщательно перемешивают после прибавления каждого реактива. Через 10 мин приливают 10 мл 5 моль/л раствора серной кислоты, перемешивают, добавляют 5 мл хлороформа из бюретки и встряхивают в течение 1 мин. Дают слоям жидкости хорошо разделиться, и нижний слой сливают в кювету с толщиной слоя в 1 см. При использовании пробирок с притертой пробкой нижний слой отбирают при помощи пипетки с грушей или отсасывают верхний слой при помощи водоструйного насоса. Фотометрируют при длине волны 570 нм в кювете с толщиной слоя 1 см против контроля.
Содержание кобальта вычисляют по калибровочному графику. В делительные воронки или пробирки с притертыми пробками вносят 0,2, 0,4, 0,8, 1,0, 1,5 и 2 мл рабочего калибровочного раствора кобальта. Объем доводят до 10 мл 0,3 моль/л соляной кислотой. Далее поступают, как и с образцом. В контроль вместо раствора кобальта вносят 0,3 моль/л раствор соляной кислоты.
По результатам измерений строят калибровочную кривую.
Расчет ведут по формуле
              AV-100
ВС '
где х — количество кобальта, мкг%; А — количество кобальта, найденное по калибровочной кривой, мкг; V — объем раствора золы, мл; В — количество крови, мл; С — количество раствора золы, взятое на анализ, мл; 100 — коэффициент для пересчета в мкг.
Источники: 49, 52.
Клиническое значение. Кобальт — составная часть витамина В12, который непосредственно участвует во многих обменных процессах в организме, в частности, он необходим для нормального кроветворения (активирует синтез протопорфирина), участвует в синтезе метионина, в процессе переноса кислорода. Кобальт необходим для жизнедеятельности микрофлоры рубца. Он ак- тивирующе влияет на щелочную фосфатазу костной ткани. Поэтому его недостаток приводит к нарушению гемопоэза, усвоения питательных веществ корма, задержке роста и развития, снижению продуктивности и воспроизводительной функции, появлению ги- покобальтоза, остеодистрофии, анемии, стеатозу печени и другим болезням.
Содержание кобальта в крови колеблется от 2,5 до 5,0 мкг% (0,43—0,85 мкмоль/л), в плазме крови 0,5—0,7 мкг% (0,085— 0,12 мкмоль/л), в молоке 1—4 мкг% (0,17—0,68 мкмоль/л). Снижение уровня кобальта в крови отмечают при его недостаточном поступлении с кормом и водой, плохом усвоении вследствие расстройства деятельности желудочно-кишечного тракта. Низкий уровень кобальта наблюдается при гипокобальтозе, гиповитаминозе В12, алиментарной и экзотической остеодистрофиях, уровс- кой болезни.

 
<< | >>
Источник:   И. П. Кондрахин.   Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: Справочник — М.: Колос,. — 520 с.. 2004

Еще по теме   МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКРОЭЛЕМЕНТОВ  :

  1.   Определение активности а-амилазы в сыворотке крови, моче, дуоденальном содержимом амилоклассическим методом со стойким крахмальным субстратом (метод Каравея).  
  2.   МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКОТОКСИНОВ  
  3.   МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНОВ  
  4.   МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СИНТЕТИЧЕСКИХ ПИРЕТРОИДОВ  
  5.   Определение ФОП методами ГЖХ.  
  6.   МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЛКАЛОИДОВ  
  7.   МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИАНИДОВ  
  8.   МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕРБИЦИДОВ ГРУППЫ 2,4-Д  
  9.   Ионометрический метод определения нитратного  
  10. Разработка метода, определения остаточных количеств препаратов. 
  11.   Определение аммиака микродиффузионным методом.  
  12. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ БИОТЕРМИЧЕСКОГО ОБЕЗВРЕЖИВАНИЯ НАВОЗА
  13.   МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФОСФОРОРГАНИЧЕСКИХ ПЕСТИЦИДОВ  
  14. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ КЛАССОВ ЛИПИДОВ ХИМИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ  
  15.   МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ: РТУТИ, КАДМИЯ, СВИНЦА, МЕДИ  
  16.   Определение алкалоццов методом ТСХ (по В. М. Серову, В. А. Волковой, 1979) 
  17. Возрастные изменения зубов, методы определения возраста
  18. 3.4. Определение доз удобрений расчётными методами