<<
>>

  МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНОВ  

  Для контроля за обеспечением животных витаминами, своевременной диагностики гиповитаминозов анализируют не только обеспеченность витаминами рационов, но и определяют их содержание в крови, молозиве, молоке, печени и других тканях, а также используют косвенные показатели.
При изучении обмена витаминов применяют биологические, химические, физико-химические, изотопные и другие методы. Содержание витаминов в биологических субстратах чаще определяют с помощью колориметрических, спектрофотометрических, спектрофлуориметрических и газохроматографических методов. Из-за сложности методов прямое определение концентрации многих витаминов в крови и других биологических субстратах проводится редко.
Определение витамина А и каротина в сыворотке крови по Бес- сею в модификации В. И. Левченко и сотр. Принцип. Метод основан на щелочном гидролизе и экстракции витамина А и каротина из сыворотки крови, молозива (молока) малолетучими растворителями и последующем спектрофотометрическом измерении поглощения света раствором (при длине волны 328 нм для витамина А и 460 нм для каротина) до и после разрушения витамина А ультрафиолетовыми лучами.
Реактивы: раствор калия гидроксида 1 моль/л в 96%-ном этиловом спирте. К 5,6 г КОН добавляют 6 мл дистиллированной воды, растворяют и доводят объем до 100 мл этанолом, тщательно перемешивают (или берут 1 объем 1 н. КОН и 10 объемов 96%-ного этанола). Реактив готовят перед работой;
ксилол-октановая смесь (1 : 1, х. ч.). В необходимых случаях ксилол перегоняют. Реактив готовят за несколько часов до начала анализа.

Оборудование: спектрофотометр СФ-46, СФ-16 или фотоэлектроколориметр КФК-2, КФК-3; ртутно-кварцевая лампа ДРТ-400; вентилятор настольный; водяная баня; пробирки из стекла «пирекс», пропускающие ультрафиолетовые лучи с притертыми пробками (55 • 8 мм); пипетки с резиновыми баллончиками или со шприцем для отсасывания жидкости.
Ход определения. В центрифужные пробирки вносят по 2 мл сыворотки крови (молозива) и 1 моль/л спиртового раствора КОН, перемешивают тонкой стеклянной палочкой до образования однородной смеси и ставят для гидролиза в водяную баню на 20 мин при 60 °С (через каждые 10 мин перемешивают). После гидролиза пробирки охлаждают в течение 10 мин в морозильной камере холодильника. В каждую из них вносят по 4 мл ксилол-окта- новой смеси, закрывают пробками, интенсивно встряхивают в течение 2—3 мин, снова охлаждают 5—7 мин, а затем центрифугируют 10—15 мин при 3000 мин *. Верхний слой, который содержит экстракт витамина А и каротиноидов в ксилол-октановой смеси, отбирают пипеткой в пробирки из стекла «пирекс».
Фотометрию проводят в кювете с толщиной слоя 10 мм, а для контроля используют ксилол-октановую смесь. На СФ-46 каротин определяют при длине волны 460 нм, ретинол — при 328 нм; на КФК-2 или КФК-3 при длине волн соответственно 440 и 315 нм.
Оптическую плотность смеси для определения витамина А проводят до и после обработки пробирок ультрафиолетовыми лучами в течение 50 мин. Для этого пробирки из стекла «пирекс» плотно закрывают притертыми стеклянными пробками и ставят на расстояние 15—20 см от лампы ДРТ-400 или ПРК-5. Для охлаждения пробирок тотчас включают два настенных вентилятора.
По разнице оптической плотности смеси, полученной при фотометрии до и после облучения ультрафиолетовыми лучами, находят концентрацию витамина А в сыворотке крови (молозиве).
Расчет ведут при определении витамина А на СФ-16 или СФ-46 по формуле
А = (Е, - Е$ ¦ 1274, а при определении на КФК-2 или КФК-3 по формуле
А = (Е1- Е2) • 1500,
где А — концентрация витамина А, мкг/100 мл; Е\ — экстинкция раствора до воздействия волной 315 нм; Е2 — экстинкция раствора после воздействия волной 315 нм; 1274 и 1500 — коэффициенты для определения витамина А.
Концентрация каротина при определении на СФ-16 или СФ-46 равна Е• 762, а при определении на КФК-2 или КФК-3 — Е' 850,
где Е — экстинкция раствора при воздействии длины волны 440 нм; 762 и 850 — коэффициенты для определения каротина.
Клиническое значение. Основными формами витамина А является витамин А-спирт (ретинол) и его производные в форме сложного эфира (ретинолпальмитата) с пальмитиновой кислотой. Главный источник витамина А в организме животных — каротин. Усвоение его и витамина А происходит в кишечнике, при этом принято считать, что усваивается только 1/3—1/4 часть каротина и около 1/7 части его превращается в витамин А. 25—50 % витамина А переходит в печень.
В условиях полноценного белкового питания, хорошей обеспеченности витамином В12, а также использования антиоксидантов повышается активность каротиндиоксигеназы, увеличивается количество молекул каротина, расщепляющихся по центру, в 1,5—2 раза возрастает эффективность синтеза витамина А.
Действие витамина А проявляется в обеспечении нормального роста и развития животных, дифференцировании эпителиальной и костной тканей, регуляции обмена веществ.
Содержание витамина А в сыворотке крови у клинически здоровых телят 5—10-дневного возраста составляет 9—15 мкг/100 мл, у телят месячного возраста 12,5—25; у 3-месячных — 15—35; у молодняка старше 3-месячного возраста 30—80; у коров в стойловый период 25—80, в пастбищный период 40—150; у свиней 20—50; у овец и лошадей 15—25 мкг/100 мл. В молозиве коров первого удоя в стойловый период содержится 140—500 мкг/100 мл витамина А, в пастбищный период 150—580 мкг/100 мл, в молоке соответственно 30—80 и 80—210 мкг/100 мл. В желтке куриных яиц — 6—75 мкг/г.
Снижение количества витамина А в крови, печени, молозиве и молоке отмечают при недостатке каротина и витамина А в кормах, плохом усвоении их вследствие хронических заболеваний органов пищеварения и печени. При снижении в крови витамина А ниже 10 мкг%, а в печени ниже 50 мкг% у взрослых животных появляются симптомы гиповитаминоза, задерживается спермогенез, сперматозоиды становятся малоподвижными, теряют оплодотворяющую способность, нарушается строение и функция эпителия органов дыхания, пищеварения, репродуктивная способность самок, появляются респираторные болезни и др.
 
<< | >>
Источник:   И. П. Кондрахин.   Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: Справочник — М.: Колос,. — 520 с.. 2004

Еще по теме   МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНОВ  :

  1.   Определение витамина в биологических жидкостях и тканях.  
  2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИТАМИНОВ В ПОЧВЕ-С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДРОЖЖЕЙ КАК ИНДИКАТОРОВ
  3.   Определение витамина С в плазме крови.  
  4. Определение витаминов, общие свойства, классификация,подготовка растений к анализу
  5.   Определение витамина Е в сыворотке крови (см. с. 195). Определение церулоплазмина в сыворотке крови.  
  6.   Определение активности а-амилазы в сыворотке крови, моче, дуоденальном содержимом амилоклассическим методом со стойким крахмальным субстратом (метод Каравея).  
  7.   ОЦЕНКА КАЧЕСТВА БЕЛКОВО-ВИТАМИННО-МИНЕРАЛЬНЫХ И АМИДО-ВИТАМИННО-МИНЕРАЛЬНЫХ ДОБАВОК  
  8.   МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКРОЭЛЕМЕНТОВ  
  9.   МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКОТОКСИНОВ  
  10.   МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СИНТЕТИЧЕСКИХ ПИРЕТРОИДОВ  
  11.   Определение ФОП методами ГЖХ.  
  12.   МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЛКАЛОИДОВ  
  13.   МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИАНИДОВ  
  14.   МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕРБИЦИДОВ ГРУППЫ 2,4-Д  
  15.   Ионометрический метод определения нитратного