<<
>>

  МЕТОДЫ ПОДСЧЕТА МИКРООРГАНИЗМОВ В СОДЕРЖИМОМ РУБЦА  

  В рубце жвачных существует множество различных микроорганизмов — бактерий и простейших. Благодаря их активной деятельности питательные вещества корма подвергаются сложным превращениям, вследствие чего образуются ЛЖК, аммиак, аминокислоты, используемые организмом в процессе обмена.
Наряду с превращением составных частей корма в соединения, доступные для усвоения в преджелудках, происходит синтез жизненно важных аминокислот, витаминов. Поступая в нижерасположенные отделы пищеварительного канала, бактерии и простейшие перевариваются и обеспечивают организм жвачных полноценными белками.

Росту и развитию большого количества разнообразной по составу микрофлоры и микрофауны способствуют определенные благоприятные условия среды в рубце, в том числе pH содержимого, постоянный ионный состав, непрерывное снабжение микроорганизмов питательной средой (кормом), анаэробные условия.

Бактерии и простейшие очень тесно реагируют на изменения кормления и содержания животных. Например, количество инфузорий увеличивается при добавке к рациону достаточного количества сена, углеводистых кормов. Если же в рационе преобладает силос, количество простейших уменьшается, изменяется их видовой состав. Летом при кормлении зелеными кормами их, как правило, становится больше по сравнению с зимним рационом. Почти полностью они исчезают при голодании, патологическом состоянии преджелудков, атонии, тимпании рубца, травматическом ретику- лоперитоните.

Определение количества инфузорий. В рубце у жвачных находится примерно 100 видов инфузорий. Преимущественно они представлены классом СШа1а, в который входят две большие группы: подкласс НокЛпсЬа и подкласс Зрко^юЬа. Инфузории первой группы равнореснитчатые (вся их поверхность равномерно покры-

та ресничками). Подкласс БрйоМсЬа (малореснитчатые) в рубце составляет 60—80 % общего количества инфузорий.

Наличие в рубце большого количества инфузорий свидетельствует о нормальном и эффективном течении ферментативных процессов.

Наиболее чувствительны к изменениям среды рубца большие инфузории. При неблагоприятных условиях существования в рубце они исчезают в первую очередь и появляются при нормализации процессов последними.

Видовой состав простейших определяют только в свежем содержимом рубца. Для этого каплю его наносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и рассматривают по микроскопом вначале при малом (окуляр х7, объектив * 10), затем при большом (окуляр *7, объектив х40) увеличении в слегка затемненном поле зрения. Поскольку инфузории, особенно большие, при комнатной температуре быстро теряют подвижность, то можно пользоваться столиком с подогревом (температура 38—39 °С). Для более детального определения строения инфузорий препарат лучше покрасить раствором Люголя или приготовить мазок и рассматривать его при большом увеличении или под иммерсией.

Реактив: 0,85%-ный раствор КаС1, слегка окрашенный метиленовым синим.

Оборудование: микроскоп; счетная камера с сеткой Горяева; лейкоцитарный меланжер.

Ход определения. В пробирку отбирают 5 мл профильтрованного содержимого рубца (жидкую часть) и добавляют 0,1 мл 4%-ного раствора формалина для фиксации инфузорий. Это позволяет подсчитывать количество инфузорий в течение 20—24 ч после взятия содержимого рубца. Содержимое пробирки тщательно перемешивают, набирают жидкость в лейкоцитарный смеситель (меланжер) до метки 1, а до метки 11 — изотонический раствор натрия хлорида, предварительно окрашенный раствором метиленового синего. Встряхивают 1—2 мин и получают разведение пробы в 10 раз.

В камеру с сеткой Горяева под покровное стекло вносят 1 каплю жидкости (первую каплю выдувают на вату). Инфузории подсчитывают в 100 больших квадратах. Общее количество инфузорий в 1 мм3 (1 мкл) определяют по формуле

х = АС/пБк, т. е. х = А • 25,

где х — количество инфузорий в 1 мм3 (1 мкл); А — количество подсчитанных инфузорий; С — разведение пробы; п — количество квадратов, в которых подсчитывали инфузории (100); 5 — площадь одного квадрата (1/25); А — высота камеры (0,1).

Количество инфузорий в 1 мл содержимого рубца определяют по формуле х = А • 1000, ибо 1 мл = 1000 мкл.

В 1 мл жидкости рубца находится от 500 тыс. до 1,2 млн инфузорий.

Количество их уменьшается при различных патологиях. Особенно мало инфузорий (70—100 тыс/мл) при смещении сычуга (А. В. Чуб, 2002).

Подсчет бактерий. Бактерии играют важную роль в процессах пищеварения жвачных животных. Они подвергают ферментному расщеплению целлюлозу (основной компонент грубых кормов), крахмал, моносахариды, кислоты (молочную, янтарную, муравьиную), липиды, принимают участие в превращении азотистых соединений. Наряду с основными видами существует ряд бактерий, которые не имеют функционального значения в рубцовом пищеварении, а попадают в рубец с кормом и водой.

Чисто рубцовые бактерии должны отвечать определенным требованиям: 1) выделенные из рубца микроорганизмы должны быть анаэробными; 2) бактерии должны присутствовать в рубце в количестве не менее чем 1 млн в 1 мл содержимого; 3) по 10 штаммов данного вида бактерий должно быть выделено не менее чем от двух животных; 4) культуры данного вида бактерий должны присутствовать в рубце животных различных географических зон; 5) конечные продукты обмена веществ полученных культур микроорганизмов должны быть типичными рубцовыми метаболитами.

В 1 мл рубцового содержимого присутствует 109— Ю10 бактерий.

Реактив: 0,85%-ный раствор NaCl.

Оборудование: микроскоп; микропипетки.

Ход определения. Содержимое рубца разводят стерильным изотоническим раствором натрия хлорида в соотношении 1:1000. Микропипеткой отбирают 0,01 мл этого разведения и про- фламбированной петлей размазывают его на предметном стекле на площади 1 см2. Как правило, делают 3—4 мазка. Мазок высушивают над пламенем спиртовки и красят по Граму. Готовый мазок исследуют под иммерсией. Подсчитывают бактерии в определенном количестве типичных полей зрения. В связи с тем что мазок не всегда получается равномерным, поля зрения для подсчета необходимо брать по всему мазку, а лучше по диагонали. В каждом мазке подсчитывают не менее 10 полей зрения и выводят среднее значение для одного поля.

Чтобы определить общее количество бактерий всего мазка, уточняют площадь поля зрения микроскопа. Так как площадь круга составляет пг, то необходимо измерить диаметр поля (в мм) с помощью объект-микрометра. Площадь мазка 100 мм2, деленная на площадь поля зрения под микроскопом, равна количеству полей зрения в мазке. Поскольку мазок приготовлен из 0,01 мл жидкости, то количество полей зрения в мазке, умноженное на 100, дает количество полей зрения в 1 мл рубцовой жидкости, разведенной до 10 (1:1000). Все эти арифметические подсчеты можно объединить формулой 10 000 : 3,1417 • г2, где 3,1417 — коэффициент, на который следует умножить среднее количество клеток в поле зрения микроскопа.

Таким образом, подсчитав необходимое количество полей зрения (по 10 в трех мазках), суммируют общее количество бактерий и вычисляют среднее количество бактерий в одном поле зрения. Полученное число умножают на коэффициент и степень разведения. Коэффициент остается постоянным до тех пор, пока объектив, положение тубуса и окуляр микроскопа не меняются.

Пример. Определяем коэффициент. Диаметр поля зрения микроскопа 0,132 мм, соответственно его радиус — 0,066 мм, а г составляет 0,004356:

10 000 = 10 000 3,1417 0,004356 0,0137'

Подсчитав 30 полей зрения (по 10 в трех мазках), определили, что в поле зрения в среднем находится 15 микробных клеток.

Соответственно ^              • 1000 = 10,9 млрд = 1,09 • Ю10 мик

робных клеток в 1 мл рубцовой жидкости.

  1.  
<< | >>
Источник:   И. П. Кондрахин.   Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: Справочник — М.: Колос,. — 520 с.. 2004

Еще по теме   МЕТОДЫ ПОДСЧЕТА МИКРООРГАНИЗМОВ В СОДЕРЖИМОМ РУБЦА  :

  1.   МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ СОДЕРЖИМОГО РУБЦА 
  2.   НЕКОТОРЫЕ ОСОБЕННОСТИ ИССЛЕДОВАНИЯ СОДЕРЖИМОГО РУБЦА  
  3.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ АЗОТИСТЫХ ВЕЩЕСТВ В СОДЕРЖИМОМ РУБЦА  
  4. Количественный метод копрооволарвоскопии и подсчет количества яиц и личинок гельминтов в г фекалий
  5.   Определение активности а-амилазы в сыворотке крови, моче, дуоденальном содержимом амилоклассическим методом со стойким крахмальным субстратом (метод Каравея).  
  6.   ЭКСПРЕСС-МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ МИКРОФЛОРЫ РУБЦА  
  7. Методы получения чистых культур и культивированияпочвенных микроорганизмов
  8. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ЭКОЛОГИЧЕСКИХ ФУНКЦИЙИ ИНДИКАТОРНЫХ СВОЙСТВ ПОЧВЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ
  9. АЦИДОЗ РУБЦА - АСЮ0515 йиМ1М15
  10. ПАРАКЕРАТОЗ РУБЦА - РАНАКЕНАТОБК йиМ1М13
  11. ПАРАЛИТИЧЕСКИЕ ФОРМЫ КОЛИК (ЗАСТОЙ СОДЕРЖИМОГО В КИШКАХ) - ОВЭТЮАТЮ 1НТЕ§ШОКиМ
  12. ТИМПАНИЯ РУБЦА - TYMPANIA RUMINIS
  13. Прокол рубца и введение лекарственных веществ в книжку.
  14.   Определение белкового и небелкового (остаточного) азота в жидкости рубца.