<<
>>

  Обнаружение уробилиногена мультитестовыми полосками или Билуген-тестом. 

  Принцип. Стабильная соль диазония (4-меток- сибензенедиазоний флиоборат) реагирует немедленно с уробили-

ногеном в кислой среде с появлением окраски. Тест очень чувствителен; предел чувствительности 0,4 мг/100 мл (7 мкмоль/л).

Другие вещества мочи не влияют на реакцию. Ложноположительные результаты получают от присутствия в моче феназопиридина.

Присутствие в моче уробилиногена оценивается по изменению цвета от белого до красного через 10 с.

Клиническое значение. Уробилиногенные тела — производные билирубина. Из попавшего в кишечник с желчью связанного билирубина под действием бактерий образуются уробили- нбиды (уробилиногены, уробилины, стеркобилиногены, стеркоби- лины). Уробилиноиды выделяются с калом, часть их реабсорбиру- ется из кишечника в кровь, через систему воротной вены поступает в печень и разрушается. Небольшое количество этих веществ по системе геморроидальных вен, минуя печень, выделяется с мочой. Выделение уробилиноидов с мочой в большом количестве носит название уробилинурии (уробилиногенурия). Уробилину- рию отмечают при гепатите, циррозе печени, гемолитической анемии и других гемолитических состояниях, кишечной непроходимости, запоре.

Обнаружение крови и кровяных пигментов. Кровяные пигменты (гемоглобин, метгемоглобин, сульфгемоглобин, гемосидерин), ми- оглобин обнаруживают бензидиновой пробой, пробой с аммония сульфатом, тест-бумагой и др.

Бензидиновая проба. Принцип. Обнаружение кровяных пигментов путем гемолиза эритроцитов и освобождение из него гемоглобина, который способен отнимать водород от амидоперина, бензидина, гвояколовой смолы и других органических соединений и переносить его на пероксид водорода с образованием окрашенных соединений. Кровяные пигменты извлекаются эфиром.

Реактивы: этиловый эфир;

5%-ный раствор бензидина в ледяной уксусной кислоте; свежий пероксид водорода;

ледяная уксусная кислота;

этиловый спирт.

Ход определения.

Готовят эфирную вытяжку мочи: к 10—15 мл добавляют 2 мл ледяной уксусной кислоты, 8 мл этилового эфира и 1 каплю этилового спирта, взбалтывают и дают постоять. К 2 мл эфирной вытяжки мочи добавляют 5 капель 5%-ного раствора бензидина в ледяной уксусной кислоте и 8—10 капель пероксида водорода. При наличии крови в моче раствор окрашивается в зеленый цвет.

Проба с гвояколовой смолой. Принцип. Тот же, как и в предыдущем методе.

Реактивы: этиловый спирт;

свежеприготовленный насыщенный раствор гвояколовой смолы в этиловом спирте;

пероксид водорода;

этиловый спирт.

Ход определения. Подготовка эфирной вытяжки мочи такая же, как указано в предыдущей пробе.

К 2 мл эфирной вытяжки мочи добавляют 6 капель спиртового свежеприготовленного насыщенного раствора гвояколовой смолы и 8 капель свежего пероксида водорода. Появление через 5—8 мин синего окрашивания свидетельствует о наличии в моче крови.

Обнаружение крови по тест-бумаге. Принцип. Тест основан на том, что гемоглобин и миоглобин катализируют окисление окрашенного индикатора с помощью органического пероксида водорода (2,5-диметил-2,5-дигидропероксигексан) с образованием си- не-зеленого окрашивания, которое кажется зеленым на желтой тест-бумаге. Неповрежденные эритроциты гемолизируются на тест-бумаге, гемоглобин осаждается и запускает реакцию, которая вызывает по соседству с каждым эритроцитом появление видимых зеленых точек.

Чувствительность пробы очень высокая — 5 эритроцитов в 1 мкл или количество гемоглобина, освобожденное из 10 эритроцитов. Тест специфичен к гемоглобину и миоглобину.

Примечание. Нельзя применять формалин в качестве консерватора мочи. Протеинурия может уменьшить окраску, вызванную гемоглобином.

Клиническое значение. Моча здоровых животных дает отрицательную реакцию на кровяные пигменты. Положительная реакция на них может быть в результате появления в моче крови, гемоглобина, миоглобина. Гематурия наблюдается при гломеруло- нефрите, мочекаменной болезни, цистите.

Гемоглобинурию наблюдают при гемолитических состояниях (кровопаразитарные болезни, отравление гемолитическими ядами), тяжелых инфекционных болезнях.

Проба на миоглобин. Принцип. Метод основан на осаждении гемоглобина аммония сульфатом и способности миоглобина при этом окрашиваться в красно-коричневый цвет.

Реактив: аммония сульфат кристаллический.

Ход определения. В 5 мл мочи растворяют 2,8 г аммония сульфата, смесь фильтруют. Если фильтрат приобретает красно-коричневый цвет, значит, в моче имеется миоглобин, а если фильтрат не окрашен — присутствует гемоглобин.

Моча здоровых животных не содержит миоглобина. Появление миоглобина в моче наблюдается при паралитической миоглобинурии, травмах мышц.

Обнаружение индикана. Проба Обермайера. В пробирку вносят

  1. мл мочи и 6 мл раствора железа хлорида (0,2—0,4 г железа хлористого растворяют в 100 мл концентрированной соляной кислоты). Через 5 мин в пробирку добавляют 1—2 мл хлороформа, содержимое встряхивают. При наличии индикана хлороформ в нижней части пробирки окрашивается в синий цвет.

Проба Яффе. Реактивы: концентрированная серная кислота; хлороформ; 2%-ный раствор калия перманганата.

Ход определения. В пробирку вносят по 2—3 мл профильтрованной мочи, концентрированной соляной кислоты и хлороформа и 1—2 капли 2%-ного раствора калия перманганата. Пробирку несколько раз переворачивают. Оценивают реакцию после оседания хлороформа. При наличии индикана хлороформ окрашивается в голубой или розовый цвет.

Клиническое значение. В моче здоровых животных ин- дикан содержится в небольшой концентрации, которую качественными реакциями не обнаруживают. Повышенное содержание индикана в моче (индиканурия) наблюдают при интенсивном гниении белков в кишечнике (копростаз, непроходимость кишечника и др.) или при распаде мышц и других тканей.

Обнаружение и определение глюкозы. Проба Гайнеса. Принцип. Метод основан на способности глюкозы восстанавливать в щелочной среде при нагревании гидрат оксида меди (синего цвета) в гидрат закиси меди (желтого цвета) и закись меди (красного цвета). Чтобы из гидрата оксида меди не образовался черный осадок оксида меди, к реактиву добавляют глицерин, который связывает гидрат оксида меди.

Реактивы: а) 13,3 г меди сульфата (СиБО^бНгО, х. ч.) растворяют в 400 мл дистиллированной воды;

б)              50 г натрия (калия) гидроксида растворяют в 400 мл дистиллированной воды;

в)              15 г глицерина (ч. или ч. д. а.) растворяют в 200 мл дистиллированной воды.

Растворы «а» и «б» смешивают и тотчас же добавляют раствор «в». Реактив длительно сохраняется в холодильнике.

Ход обнаружения. Вариант 1. К 6—8 мл мочи прибавляют 20 капель реактива до появления голубоватой окраски, смешивают и нагревают верхнюю часть пробирки до начала кипения. Нижняя часть пробирки — контроль. При наличии глюкозы в верхней части пробирки в моче появляется желтая окраска.

Вариант 2. В пробирку вносят 3—4 мл реактива, 8—12 капель мочи. Кипятят или нагревают до кипения. При наличии глюкозы в моче раствор становится желто-бурым. Чувствительность пробы около 0,03 %.

Глюкозу в моче можно определить специальными мультитести- рованными полосками. Обнаружение глюкозы основано на специфической глюкозо-оксидазно-пероксидазной реакции. Окраска изменяется от желтой (норма) через светло-зеленую в темно-зеленую. Чувствительность в образце мочи, не содержащей аскорбиновой кислоты, около 40 мг/100 мл (2,2 ммоль/л). Результат сравнивают со шкалой через 60 с.

Количественное определение глюкозы в моче. Определение глюкозы в моче возможно по цветной реакции с ортотолуидином (см. Определение глюкозы в крови) или поляриметрическим методом.

 

<< | >>
Источник:   И. П. Кондрахин.   Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: Справочник — М.: Колос,. — 520 с.. 2004

Еще по теме   Обнаружение уробилиногена мультитестовыми полосками или Билуген-тестом. :

  1.   Тест на билирубин с использованием полосок Билуген-тест или мультитестовых полосок. 
  2. ОБНАРУЖЕНИЕ И УЧЕТ МИКРООРГАНИЗМОВ, УЧАСТВУЮЩИХ В КРУГОВОРОТЕ АЗОТА
  3. ДИСТАНЦИЯ ОБНАРУЖЕНИЯ
  4. Обнаружение гранозана и других ртутьорганических ядохимикатов в зерне
  5. Качественное обнаружение фосфида цинка (по фосфору)
  6. ОБНАРУЖЕНИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ, УЧАСТВУЮЩИХ В ПРЕВРАЩЕНИЯХ ФОСФОРА, СЕРЫ, ЖЕЛЕЗА И МАРГАНЦА
  7. Обнаружение фтора в патологическом материале с помощью ализарин- циркониевого лака
  8.   Экспресс-метод обнаружения ацетоновых тел в сыворотке (плазме) крови. 
  9. Обнаружение и учет численности микроорганизмов в почвахметодом посева на плотные питательные среды
  10. 9-5. Или прогресс форм, или прогресс функций
  11. ВЗАИМООТНОШЕНИЯ ИЛИ ОТНОШЕНИЕ!
  12. «Саморемонт», или регенерация
  13. ПАРАЗИТЫ ИЛИ ОХОТНИКИ?
  14. Предок или урод?
  15. 5-15* С Платоном или без?
  16. ПОЛЕЗНАЯ ПОЛИКУЛЬТУРА ИЛИ СООБЩЕСТВО
  17. Эфедра, или хвойник (Ephedra)
  18. Неандертальцы или человек прямоходящий?
  19. РЕДЬКА ПОСЕВНАЯ, ИЛИ КИТАЙСКАЯ
  20. Органы чувств, или анализаторы