<<
>>

  ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ УРЕАЗЫ В ЖМЫХАХ И ШРОТАХ (ГОСТ 13979.9-69)[3]  

  Принцип. Метод основан на изменении pH фосфатного буферного раствора, которое образуется в результате воздействия уре- азы на содержащуюся в растворе мочевину.
Реактивы: мочевина;
известь натронная;
раствор фосфатный буферный образцовый с pH около 7,0;
калия фосфат однозамещенный (КН7РО4) или натрия фосфат однозамещенный 2-водный (МаН2Р04 • 2Н20);
калия фосфат двузамещенный 3-водный (К1НРО4 • ЗН20) или натрия фосфат двузамещенный безводный (КазНРС^), или натрия фосфат двузамещенный 12-водный (ИазНРС^ • 12Н2О);
вода дистиллированная, не содержащая углекислого газа (прокипяченная).
Оборудование: весы аналитические; рН-метр и аналогичный прибор, с пределами измерений от минус 1 до 14 единиц pH с ценой деления индикатора от 0,01 до 0,1; электрокофемолка бытовая или аналогичное измельчающее устройство; баня водяная с терморегулятором или другое термостатирующее устройство, позволяющее поддерживать температуру 30±2 °С; электроплитка бытовая; термометр жидкостный стеклянный, позволяющий измерять температуру в диапазоне 0—50 °С, с ценой деления 1—2 °С; колба мерная; стаканы В-1-100 или В-1-150ТС; колбы конические или колбы плоскодонные; цилиндр; сито с отверстиями диаметром 0,5 мм из набора лабораторных сит.
Подготовка к измерениям. Дистиллированную воду кипятят на электроплитке в течение 15 мин для удаления углекислого газа и охлаждают в колбе, закрытой пробкой и снабженной трубкой с натронной известью.
При отсутствии стандарт-титров (фиксаналов) буферный раствор готовят следующим образом. Предварительно калий одно- и двузамещенный подвергают перекристаллизации. С этой целью отдельно в химические стаканы помещают соли, добавляют немного дистиллированной воды (делают перенасыщенный раствор), нагревают на электрической плитке до полного растворения солей, охлаждают в холодильнике (кристаллы выпадают в осадок через 15 мин), сливают воду и кристаллы высушивают в сушильном шкафу при температуре 110оС, охлаждают в эксикаторе.
Фосфатный буферный раствор с концентрацией 0,05 моль/л готовят из смеси двух растворов одно- и двузамещенного калия фосфата аналогичной концентрации. Для приготовления первого берут 3,40 г и второго — 4,35 г соответствующей соли, полученной после перекристаллизации, переносят в мерные колбы на 500 см3,

растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, тщательно перемешивают и содержимое доводят дистиллированной водой до метки. Фосфатный буфер с pH 7,0 получают путем смешивания 233,4 см3 первого и 366,6 см3 второго растворов в мерной колбе на 1000 см3 с добавлением до метки дистиллированной водой. Водородный показатель (pH) полученного буферного раствора проверяют на рН-метре (раствор А). Полученный раствор А хранят в темном месте не более 1 мес.
Для приготовления буферного раствора Б с мочевиной растворяют мочевину в растворе А в колбе вместимостью 500 или 1000 см3 из расчета 1,5 г мочевины на 50 см3 раствора А. Раствор Б хранят в темном месте не более 10 дней.
Для подготовки образца из средней пробы методом диагонального деления отбирают пробу для анализа массой около 10 г. Измельчают ее до прохода не менее 60 % через сито с отверстиями диаметром 0,5 мм. Остаток на сите вновь измельчают и просеивают через сито. Просеянный материал вновь смешивают с остатками на сите и используют для взятия пробы. При масличности продукта более 2 % после измельчения его обезжиривают.
Ход определения. На аналитических весах взвешивают 3 пробы тщательно измельченного материала массой 1 ±0,01 г и помещают в стеклянные стаканы вместимостью 100 или 150 см3. В один стакан приливают 50 см раствора А и помещают в водяную баню с температурой 30 ± 2° С. Во второй и третий стаканы с интервалом в 5 мин приливают по 50 см3 раствора Б, помещают их немедленно после приливания раствора в ту же водяную баню. Время термостатирования 30 мин, при этом следует каждые 5 мин перемешивать содержимое стакана стеклянной палочкой, заканчивают перемешивание за 5 мин до конца нагрева. По истечении 30 мин выдержки жидкость над осадком из каждого стакана декантируют в стаканчики прибора и определяют pH каждого раствора в соответствии с прилагаемой к прибору инструкцией.
Активность уреазы {А) в единицах pH вычисляют по формуле
А = рН( - рН0,
где рН[ — значение pH в основном измерении (с раствором Б); рН0 — значение pH в контрольном измерении (с раствором А).
За окончательный результат измерения принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных измерений, расхождение между которыми не должно превышать 30 % от среднего арифметического значения pH при доверительной вероятности 0,05. Все вычисления проводят с записью результатов до второго десятичного знака.
Источник: 59.

 
<< | >>
Источник:   И. П. Кондрахин.   Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: Справочник — М.: Колос,. — 520 с.. 2004

Еще по теме   ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ УРЕАЗЫ В ЖМЫХАХ И ШРОТАХ (ГОСТ 13979.9-69)[3]  :

  1.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ СЫРОЙ ЗОЛЫ (ГОСТ 13979.6-69)  
  2.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ КАЛЬЦИЯ (ГОСТ 17258-71)  
  3.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ СЫРОЙ КЛЕТЧАТКИ (ГОСТ 13496.2-91)  
  4.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПЕРВОНАЧАЛЬНОЙ ВОДЫ (ГОСТ 13496.3-92)  
  5.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕЙ КИСЛОТНОСТИ (ГОСТ 13496.12-98)  
  6.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ СЫРОГО ЖИРА (ГОСТ 13496.15-97)  
  7.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ФОСФОРА (ГОСТ 26657-97)  
  8.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ КАРОТИНА (ГОСТ 13496.17-95)  
  9.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ КИСЛОТНОГО ЧИСЛА ЖИРА (ГОСТ 13496.18-85)  
  10.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ АЗОТА И СЫРОГО ПРОТЕИНА ПО КЪЕЛЬДАЛЮ (ГОСТ Р 51417-99 (ИСО 5983-97))  
  11.   Определение активности а-амилазы.  
  12.   Определение активности пероксидазы (КФ 1.11.1.7) в крови. 
  13.   Определение активности глутатионредуктазы (КФ 1.6.4.2) в крови. 
  14.   Определение активности катал азы (КФ 1.11.1.6) в крови. 
  15.   ЭКСПРЕСС-МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ МИКРОФЛОРЫ РУБЦА  
  16.   Определение антиокислительной активности (АОА) плазмы крови.