<<
>>

  Определение антиокислительной активности (АОА) плазмы крови.  

  Принцип. Метод основан на регистрации скорости окисления восстановительной формы 2,6-дихлорфенолиндофенола (2,6-ДХФИФ) кислородом, растворенным в реакционной среде. При этом бесцветная лейкоформа 2,6-ДХФИФ переходит в окрашенную форму, имеющую максимум поглощения при 600 нм.
Реактивы; 0,25 моль/л фосфатный буфер, pH 7,4.
7,8 г NaH2P04 • 2Н20, растворяют в 100 мл дистиллированной воды и
  1. г К2НРО4 • ЗН2О — в 100 мл дистиллированной воды. К 81 мл второго раствора приливают 19 мл первого раствора и устанавливают нужное значение pH с помощью рН-метра. Затем раствор доводят до 200 мл дистиллированной водой;

0,8 ммоль/л водный раствор 2,6-дихлорфенолиндофенола в окисленной форме. Для этого 11,6 мл 2,6-ДХФИФ растворяют в 50 мл дистиллированной воды. Раствор готовят непосредственно перед анализами.
  1. ммоль/л раствор закисного сернокислого железа. 44,5 г Ре504 • 7Н20 растворяют в 50 мл дистиллированной воды. Раствор готовят непосредственно перед анализами.

Оборудование: спектрофотометр с термостатируемой кюветой или спектрофотометр «Спекол» с термостатируемой кюветой; ультратермостат; баня водяная; весы аналитические; колбы мерные; пипетки измерительные; микропипетки или микрошприц на 10 и 20 мкл.
Ход определения. В термостатируемую кювету последовательно добавляют 0,5 мл фосфатного буфера (pH 7,4), 0,15 мл раствора 2,6-ДХФИФ, 0,15 мл раствора закисного сернокислого железа и быстро перемешивают. Все растворы должны иметь температуру 37 °С. Сразу после перемешивания быстро добавляют 10 или 20 мкл плазмы крови, перемешивают и через каждые 30 с (по секундомеру) после добавления плазмы на протяжении 5 мин измеряют оптическую ПЛОТНОСТЬ при 600 НМ против ВОДЫ (^5оп)-
Определяют оптическую плотность при 600 нм инкубационной среды, в которой 2,6-ДХФИФ окислен полностью. Для этого в кювету добавляют те же компоненты, но вместо раствора Ре504 и пробы добавляют равные им объемы дистиллированной воды (А«акс)'
Расчет результатов начинают с определения констант скоростей окисления 2,6-ДХФИФ в контроле (А^от-р) и опыте (Коп) по формулам
V _ 1пАпах - 1п(^шах- ^5к) у _ 1пАпах- ^П(^шах- -®5оп)
АКОНТр              д              И ЛОП              д              gt;
где 1п — логарифм натуральный (положительный).
Рассчитывают константу ингибирования (Ки) плазмой крови окисления 2,6-ДХФИФ, являющуюся показателем ее антиокисли- тельной активности по формуле
Г _ *к-*оп Аи              С~’
где Кк — антиокислительная активность плазмы крови, мл • мин-1; Кк — константа скорости окисления 2,6-ДХФИФ в контроле; Коп — константа скорости окисления 2,6-ДХФИФ в опыте; С — концентрация плазмы в инкубационной смеси, мг/л.
Примечания. 1. Плазма крови должна быть без гемолиза. 2. Исследование должно проводиться не позднее 6 ч после взятия крови.
Клиническое значение. АОА крови свидетельствует
о              суммарной защите организма от токсичных для структур клеточных мембран и функциональной активности белков — ферментов продуктов ПОЛ. Повышение АОА крови свидетельствует о высокой способности организма противостоять воздействию факторов, активизирующих свободнорадикальное окисление липидов; снижение, наоборот, указывает на уменьшение его антиокислитель- ной защиты.
Антиокислительная активность плазмы крови у животных колеблется от 0,8 до 2,5, в том числе у кур от 0,2 до 0,5 л х мин-1 • 10 .
Источник: 11.
  1.  
<< | >>
Источник:   И. П. Кондрахин.   Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: Справочник — М.: Колос,. — 520 с.. 2004

Еще по теме   Определение антиокислительной активности (АОА) плазмы крови.  :

  1.   Определение активности креатинкииазы (КК) в сыворотке (плазме) крови с использованием креатинфосфата в качестве субстрата. 
  2.   Определение витамина С в плазме крови.  
  3.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИНСУЛИНА В СЫВОРОТКЕ (ПЛАЗМЕ) КРОВИ (DIAGNOSTICSYSTEMLABORATORY, США)  
  4.   Определение токоферолов в плазме крови с а,а'-дипиридилом (2, 2'-дипиридил).  
  5.   Определение каротина в сыворотке (плазме) крови по Карп н Прейсу в модификации Юдкина. 
  6.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОРТИЗОЛА В СЫВОРОТКЕ (ПЛАЗМЕ) КРОВИ (DIAGNOSTICSYSTEMLABORATORY, США)  
  7.   Определение содержания Р-липопротеидов в сыворотке (плазме) крови (по Бурштейну в модификации Виноградовой).  
  8.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРОГЕСТЕРОНА В СЫВОРОТКЕ ИЛИ ПЛАЗМЕ КРОВИ (DIAGNOSTIC AUTOMATION INC., США)  
  9.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЭСТРАДИОЛА В СЫВОРОТКЕ ИЛИ ПЛАЗМЕ КРОВИ (DIAGNOSTIC AUTOMATION INC., США)  
  10.   9.1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТРИЙОДТИРОНИНА (Т3) В СЫВОРОТКЕ ИЛИ ПЛАЗМЕ КРОВИ (DIAGNOSTIC SYSTEM LABORATORY, США) 
  11.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПАРАТИРЕОИДНОГО ГОРМОНА (ПТГ) В СЫВОРОТКЕ (ПЛАЗМЕ) КРОВИ (DIAGNOSTICSYSTEMLABORATORY, США)  
  12.   Определение активности пероксидазы (КФ 1.11.1.7) в крови. 
  13.   Определение содержания неэтерифицированных жирных кислот (НЭЖК) в сыворотке (плазме) крови (по Лауреллу и Тибблингу).  
  14.   Определение магния в сыворотке (плазме) крови по цветной реакции с титановым желтым (по Кункелю, Пирсону, Швейгерту в модификации И. В. Петрухина). 
  15.   Определение активности глутатионредуктазы (КФ 1.6.4.2) в крови. 
  16.   Определение активности катал азы (КФ 1.11.1.6) в крови. 
  17.   Определение активности холинэстеразы в сыворотке крови по гидролизу ацетилхолинхлорида. 
  18.   Определение активности у-глутамилтранспептидазы (у-глута- милтрансферазы) в сыворотке крови с помощью набора реактивов.  
  19.   Определение активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови по гидролизу р-глицерофосфата (метод Бодански).