<<
>>

  Определение белковых фракций в сыворотке крови турбидимет- рическим (нефелометрическим) методом.  

  Принцип. Различные белковые фракции сыворотки крови способны осаждаться фосфатными растворами определенной концентрации. При этом образуется очень мелкая взвесь и раствор мутнеет. По степени мутности растворов, устанавливаемой с помощью фотоэлектроколориметра, судят о концентрации белков в исследуемой пробе.
Реактивы: основной фосфатный раствор.
33,5 г натрия гидроксида (ч. д. а., х. ч.) растворяют в 400 мл дистиллированной воды, добавляют 226,8 г калия фосфата однозамещенного (КН2РО4, ч. д. а., х. ч.). После растворения охлаждают до комнатной температуры и добавляют дистиллированную воду до объема 500 мл;
рабочие фосфатные растворы. В мерные колбы на 100 мл берут 92,4 мл (№ 1), 74,9 мл (№ 2), 58,8 мл (№ 3), 48,7 мл (№ 4) основного фосфатного раствора и доводят объем дистиллированной водой до метки. Тщательно размешивают путем встряхивания. При хранении разведенных растворов для предупреждения бактериального загрязнения добавляют по 1 капле хлороформа на 100 мл раствора.
Оборудование: фотоколориметр; химические пробирки; пипетки на 1, 2, 5, 10 мл, бюретка; мерные колбы на 100 и 500 мл.
Ход определения. На каждую пробу сыворотки крови в штатив устанавливают по 6 пробирок, обозначив их № 0, 1, 2, 3,
  1. и 5. В пробирку № 0 вносят 10 мл дистиллированной воды, в пробирки № 1, 2, 3 и 4 — по 5 мл соответствующих рабочих фосфатных растворов (№ 1—4). В пробирку № 5 вносят 0,5 л сыворотки крови, 0,75 мл дистиллированной воды и 3,75 мл основного фосфатного раствора, закрывают пробкой и перемешивают путем перевертывания ее 5—6 раз. После этого переносят по 0,5 мл смеси в пробирки № 1, 2, 3, 4 и 1 мл в пробирку № 0. Содержимое пробирок тщательно, но осторожно перемешивают, избегая образования пузырьков воздуха. Через 15 мин определяют на ФЭКе оптическую плотность (Е) растворов при красном светофильтре в кювете с толщиной слоя 1 см против контроля (проба № 0). Проводят измерение в обратной последовательности — сначала в пробирке № 4, а затем в пробирках № 3, 2 и 1.

Расчет ведут по схеме: Е пробирки № 1 — Е пробирки № 2= = Е альбуминов; Е пробирки №2 — Е пробирки № 3 = Е а-глобу- линов; Е пробирки № 3 — Е пробирки № 4 = Е Р-глобулинов; Е пробирки №4 = ? у-глобулинов.
Принимая сумму Е альбуминов и Е всех глобулиновых фракций за 100 %, вычисляют содержание каждой фракции в относительных процентах. Зная концентрацию общего белка сыворотки крови, можно произвести пересчет в абсолютные величины.
Пример расчета: Е пробирки № 1 = 0,800; Е пробирки № 2 = = 0,400; Е пробирки № 3 = 0,300; Е пробирки № 4 = 0,200. Тогда Е альбуминов составит 0,800 — 0,400 = 0,400; Е у-глобулинов 0,400 —
  • 0,300 = 0,100; Е Р-глобулинов 0,300 — 0,200 = 0,100; Е у-глобули- нов = 0,200.

Для облегчения расчета нулевые знаки в показаниях экстинк- ции не учитывают. Ошибка метода составляет + 4 %.
Источники: 32, 52.
Клиническое значение. Альбумин — простой низкомолекулярный белок (40—70 тыс. дальтон), синтезируется в печени. Основные его функции — связывание воды, обеспечение коллоидно-осмотического (онкотического) давления, транспорт ионов магния, кальция, билирубина, СЖК, стероидных гормонов и других веществ эндогенного и экзогенного происхождения.
Снижение содержания альбумина наблюдается при уменьшении его синтеза, обусловленного поражением печени (гепатит, гепатоз,

цирроз, амилоидоз печени), острой и хронической пневмонией, бронхопневмонией, лейкозом и др.; при недостатке протеина в кормах, плохом его усвоении, больших потерях с мочой (алиментарная дистрофия, гипокобальтоз, диарея до наступления обезвоживания).
Увеличение содержания альбуминов встречается очень редко и чаще связано с дегидратацией организма.
Из а|-глобулинов в сыворотке крови обнаруживают два белка: а!-антитрипсин и а(-гликопротеин, а]-Антитрипсин — ингибитор ряда протеаз. Его содержание повышается при механическом повреждении тканей и воспалительных заболеваниях.
а[-Гликопротеин участвует в транспорте прогестерона и тестостерона. Содержание его возрастает при воспалительных процессах, снижается при циррозе печени.
аг-Глобулины содержат аг-макроглобулин, гаптоглобин и церу- лоплазмин. с^-Макроглобулин — цинксодержащий гликопротеин с большой молекулярной массой. Ингибирует протеолитические ферменты трипсин, химотрипсин, тромбин, плазмин и калликре- ин. Содержание его увеличивается при циррозе печени, нефрозе, сахарном диабете, снижается при ревматоидном полиартрите.
Гаптоглобин связывает и транспортирует свободный гемоглобин А в клетки ретикулоэндотелия. Содержание его снижается при гепатите, гемолитической анемии, увеличивается при острых воспалительных процессах, сахарном диабете.
Церулоплазмин — медьсодержащий белок, окисляет трехвалентное железо в двухвалентное. Уровень его растет при остром воспалительном процессе, холестазе, ревматоидном артрите, снижается при циррозе печени, хроническом гепатите.
Содержание а2-глобулинов в крови здоровых животных незначительное.
Р-Глобулины содержат два белка — трансферин и гемопексин. Трансферин участвует в транспорте трехвалентного железа, снижается его содержание при воспалительных процессах. Гемопексин переносит сывороточный гем. Уровень его падает при гемолитической анемии, заболеваниях печени, нефротическом синдроме, повышается — при воспалительном процессе.
у-Глобулины — иммунные белки. Уровень их повышается при инфекционном воспалительном процессе, а также за счет патологических белков — парапротеинов, относящихся к иммуноглобулинам. Увеличение содержания у-глобулинов, умеренное повышение уровня р-глобулинов при заметном снижении альбуминов присуще гепатиту, токсическому гепатозу, лейкемии, злокачественным новообразованиям, воспалению легких и бронхов.
Снижение у-глобулинов отмечают у новорожденных животных при физиологической незрелости иммунной системы, иммунных дефицитах. Гипогаммаглобинемию отмечают при белковом недокорме, истощении, воздействии на организм радиации.
Выраженное увеличение количества а-глобулинов с умеренным снижением альбуминов характерно для поздней стадии пневмонии, хронического эндокардита, холецистита, уроцистита, пиелита, токсикозов беременности.
Повышение уровня а2- и р-глобулинов при значительном снижении количества у-глобулинов бывает при липоидном и амилоидном нефрозе, нефрите, нефросклерозе, токсикозе беременности, кахексии, злокачественных новообразованиях.
Значительное увеличение содержания у-глобулинов, умеренное увеличение (3-глобулинов при заметном снижении количества альбуминов присуще гепатитам, токсическому гепатозу, кетозу, гемолитическим процессам, лейкемиям и злокачественным новообразованиям кроветворного и лимфатического аппарата.
При циррозе печени, коллагенозе и некоторых других болезнях наблюдают значительное снижение содержания альбуминов и заметное увеличение у-глобулинов. Для механической желтухи характерно уменьшение уровня альбуминов и умеренное увеличение содержания а.2-, (3- и у-глобулинов.
 
<< | >>
Источник:   И. П. Кондрахин.   Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: Справочник — М.: Колос,. — 520 с.. 2004

Еще по теме   Определение белковых фракций в сыворотке крови турбидимет- рическим (нефелометрическим) методом.  :

  1.   Определение белковых фракций в сыворотке крови. 
  2.   Определение общего белка в сыворотке крови рефрактометрическим методом.  
  3.   Определение свободного аминного азота в сыворотке крови по методу Г. А. Узбекова в модификации 3. С. Чулковой.  
  4.   Определение активности а-амилазы в сыворотке крови, моче, дуоденальном содержимом амилоклассическим методом со стойким крахмальным субстратом (метод Каравея).  
  5.   Определение витамина Е в сыворотке крови (см. с. 195). Определение церулоплазмина в сыворотке крови.  
  6.   БЕЛКОВЫЙ СОСТАВ СЫВОРОТКИ КРОВИ  
  7.   Определение токоферолов в тканях и сыворотке крови методом колоночной хроматографии. 
  8.   Определение билирубина в сыворотке крови животных по методу Ендрассика—Клеггорна—Грофа в модификации В. И. Левченко и В. В. Влизло. 
  9.   Определение активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови по гидролизу р-глицерофосфата (метод Бодански).  
  10.   Определение билирубина в сыворотке крови по диазореакции (метод Ендрассика—Клеггорна—Грофа).  
  11.   Определение активности сорбитолдещдрогеназы (СДГ) в сыворотке крови по реакции с резорцином (метод Севела—Товарека).