<<
>>

  Определение глюкозы в безбелковом фильтрате крови по Сомод- жи.  

  Принцип. Метод основан на окислении глюкозы в щелочной среде при кипячении с меди сульфатом. При йодометрическом определении образовавшаяся закись меди окисляется йодом. Последний освобождается подкислением определенного количества йодноватисто-кислого калия и калия йодид, а оставшийся свободный йод оттитровывается гипосульфитом.
Реактивы: 5 %-ный раствор цинка сульфата.
5 г цинка сульфата 7-водного растворяют в 95 мл дистиллированной воды;
0,3 моль/л раствор натрия гидроксида. 12 г натрия гидроксида (ч. д. а. или х. ч.) растворяют в 700 мл дистиллированной воды, охлаждают и доводят водой до 1 л. Первый и второй реактивы должны нейтрализовать друг друга. Последнее проверяют медленным титрованием с индикатором фенолфталеином;
реактив Сомоджи: меди сульфат 5-водный (ч. д. а., х. ч.) 8 г; натрия карбонат безводный (ч. д. а., х. ч.) 30 г; калий-натрий виннокислый 4-водный (сегнетова соль) (ч. д. а.) 30 г; калия йодид (ч. д. а., х. ч.) 5 г; натрия сульфат безводный (ч. д. а., х. ч.) 180 г; раствор 1 моль/л натрия гидроксида (х. ч.) 40 мл; калий йоднова- тистокислый 1 моль/л раствор (35,67 г КЮ3, ч. д. а., х. ч. на 1 л) 5—10 мл.
Приготовление реактива. Натрид карбонат и сег- нетову соль растворяют в 200 мл горячей воды, добавляют раствор натрия гидроксида и меди сульфат, перемешивают, после чего кипятят для удаления СО2. Натрид сульфат растворяют в 500 мл горячей дистиллированной воды и нагревают до кипения. Оба раствора смешивают и добавляют калий йодистый, предварительно растворенный в малом объеме воды. Затем вливают раствор калия йодноватистокислого и после охлаждения доливают водой в мерной колбе до 1 л. Через несколько дней раствор фильтруют. Реактив рекомендуется держать при комнатной температуре в склянке из темного стекла. Перед употреблением его необходимо немного подогреть и растворить осадок. Приготовленный реактив титруют 0,005 н. раствором гипосульфита. На 1 мл реактива Сомоджи должно пойти 1 мл 0,005 н. раствора гипосульфита. Титр раствора Сомоджи доводят раствором калия йодноватистокислого 1 моль/л;
2 н. (1 моль/л) раствор серной кислоты. 56 мл концентрированной серной кислоты (плотность 1,84) доводят водой в мерной колбе до 1 л;
0,005 н. раствор натрия тиосульфита (гипосульфита) 5-водного. Готовят перед анализом из 0,1 н. раствора, приготовленного из стандарт-титра (фиксанала);
1%-ный раствор крахмала, приготовленного в насыщенном растворе натрия хлорида;
1%-ный спиртовый раствор фенолфталеина;
натрий фторид.
Оборудование: сахарные пробирки; водяная баня; микробюретки на 5 мл; колбы из термостойкого стекла на 500 и 1000 мл; термос на 3—5 л.
Ход определения. Для исследования используют цельную гепаринизированную кровь, стабилизированную фтористым натрием из расчета 5—10 мг/мл. Кровь необходимо по возможности быстрее доставить в лабораторию в термосе со льдом, где получают безбелковый фильтрат: к 1 части крови добавляют 5 частей дистиллированной воды, 2 части 0,3 моль/л раствора натрия гидроксида и 2 части 5%-ного раствора цинка сульфата (например, 5 мл крови + 25 мл воды + 10 мл раствора натрия гидроксида + 10 мл 5 %-ного раствора цинка сульфата).
Тщательно перемешивают и через 30 мин фильтруют или центрифугируют при 3000 мин-1 в течение 10 мин. Фильтрат (центрифугат) сливают в пробирку и закрывают пробкой. Хранить можно в холодильнике не более 2—3 дней. Этот фильтрат можно использовать для определения кетоновых тел.
В пробирку вносят 5 мл прозрачного фильтрата (центрифугата) крови, 5 мл реактива Сомоджи, тщательно перемешивают и помещают на 15 мин (точно) в кипящую водяную баню. Охлаждают до комнатной температуры. После охлаждения содержимое пробирки подкисляют 2,5—3,0 мл 2 н. раствора серной кислоты. Чтобы под- кисление пробы произошло одновременно, рекомендуется добавлять кислоту быстро, встряхивая пробирку. Затем в пробирку вносят 2—3 капли 1 %-ного раствора крахмала, перемешивают. Титруют из микробюретки 0,005 н. раствором гипосульфита до исчезновения синей окраски. Контроль делают как опыт, но вместо фильтрата крови берут 5 мл дистиллированной воды.
Расчет ведут по формуле
х= {А- В)- 30,
где х — концентрация глюкозы, мг%; А — количество 0,005 н. раствора гипосульфита, затраченного на титрование контрольной пробы, мл; В— количество 0,005 н. раствора гипосульфита, затраченного на титрование опытной пробы, мл; 30 — коэффициент для пересчета в мг%.
При пересчете мг% в ммоль/л полученную величину умножают на 0,0555. Ошибка метода составляет ±5 %.
Источник: 52.
Клиническое значение. Глюкоза — главный источник энергии для клеток организма. На ее долю приходится более 90 % всех низкомолекулярных углеводов.
Относительно постоянный уровень глюкозы в крови поддерживается благодаря сахароснижающему свойству инсулина и сахароповышающему свойству адреналина, глюкогона и глюкокортикоидов.
Концентрация глюкозы в венозной крови на 10 % меньше, чем в капиллярной, она быстро снижается благодаря гликолизу. Поэтому глюкозу в крови определяют сразу после ее взятия или проводят осаждение белков трихлоруксусной кислотой непосредственно на ферме или добавляют ингибитор.
Нормативы глюкозы в крови животных приведены в приложениях 4—7.
Снижение сахара в крови (гипогликемия) бывает при кетозе, вторичной остеодистрофии, послеродовом парезе, некоторых формах ожирения, токсических поражениях печени. Часто оно следствие недостатка в кормах легкоусвояемых углеводов, большой потребности в глюкозе при высококонцентратном типе кормления, преобладании в рационах кислых кормов. К гипогликемии приводят передозировки инсулина.
Повышение сахара в крови (гипергликемия) может быть стойким и непродолжительным — при скармливании скоту больших количеств сахаристых кормов, а также при испуге, высокой температуре, стрессовом состоянии. Стойкая гипергликемия бывает при сахарном диабете. Однако следует иметь в виду то обстоятельство, что при сахарном диабете, сопровождаемом выраженной глюкозу- рией, содержание глюкозы в крови может быть в пределах нормы. Это обусловлено понижением почечного порога (ослабление реабсорбции глюкозы в почечных канальцах).
В моче здоровых животных глюкозу, как правило, не обнаруживают. Появление ее в моче (глюкозурия) бывает при сахарном диабете, когда уровень глюкозы в крови превышает пороговую концентрацию. Почечный порог глюкозы в крови у собак 6,66 ммоль/л.
Почечную глюкозурию отмечают при снижении почечного порога вследствие дистрофии почечных канальцев даже при нормальной концентрации глюкозы в крови. Это так называемый «почечный» диабет.
 
<< | >>
Источник:   И. П. Кондрахин.   Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: Справочник — М.: Колос,. — 520 с.. 2004

Еще по теме   Определение глюкозы в безбелковом фильтрате крови по Сомод- жи.  :

  1.   Определение витамина Е в сыворотке крови (см. с. 195). Определение церулоплазмина в сыворотке крови.  
  2.   Определение общего рибофлавина в крови.  
  3.   Определение кетоноиых тел в крови йодометрическим методом.  
  4.   Метод неферментативного определения лактата и пирувата в одной пробе крови.  
  5.   Определение активности пероксидазы (КФ 1.11.1.7) в крови. 
  6.   Определение восстановленного глутатиона в крови.  
  7.   Определение малонового диальдепща в крови.  
  8.   Определение сиаловых кислот в сыворотке крови по реакции с резорцином. 
  9.   Определение белковых фракций в сыворотке крови. 
  10.   Определение витамина С в плазме крови.  
  11.   Определение марганца в крови перйодатным методом.  
  12.   Определение активности катал азы (КФ 1.11.1.6) в крови. 
  13.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗЕРВНОЙ ЩЕЛОЧНОСТИ КРОВИ ДИФФУЗНЫМ МЕТОДОМ ПО И. П. КОНДРАХИНУ  
  14.   Определение общего белка в сыворотке крови рефрактометрическим методом.  
  15.   Определение активности глутатионредуктазы (КФ 1.6.4.2) в крови.