<<
>>

  Определение кетоноиых тел в крови йодометрическим методом.  

  Принцип. Из безбелкового фильтрата перегоняют свободный ацетон и ацетон, образовавшийся из ацетоуксусной и (3-оксимасля- ной кислот, прибавлением хромовой смеси и кипячением. В дистилляте определяют весь перегнанный ацетон, связывая его прибавлением йода и щелочи.
Ацетон с йодом в щелочной среде об

разует йодоформ и натрия йодид. Избыток йода освобождают прибавлением серной кислоты и определяют при помощи титрования раствором натрия тиосульфата. По разности между контролем и опытом определяют связанный йод.

Реактивы: 0,3 моль/л раствор натрия гидроксида;

5%-ный раствор цинка сульфата (ZnSCgt;4 • 7Н2О);

бихроматная смесь: 20 г двухромовокислого калия, 200 мл концентрированной серной кислоты, дистиллированная вода до 1 л. В мерную колбу на 1 л вливают 400—600 мл дистиллированной воды, осторожно приливают 200 мл серной кислоты и, постоянно помешивая, 20 г мелкоистолченного калия двухромовокислого. После растворения вещества и остывания реактива доливают водой до метки;

20%-ный раствор серной кислоты (по объему);

10%-ный раствор натрия гидроксида;

001 н. (0,005 моль/л) раствор йода. Готовят перед анализом из 0,1 н. раствора, приготовленного из фиксанала. Титр 0,01 н. раствора йода каждый раз проверяют по 0,01 н. (0,01 моль/л) раствору натрия тиосульфата (натрия серноватистокислого 5-водного, Na2S03-5H20);

0,01 моль/л раствор натрия тиосульфата. Готовят из стандарт-титра последовательно, вначале 0,1 моль/л, а затем 0,01 моль/л;

1%-ный раствор крахмала. Готовят заранее насыщенный раствор натрия хлорида, наливают его в мерную колбу вместимостью 100 мл больше чем до половины, 1 г растворимого крахмала растворяют в пробирке в нескольких миллилитрах дистиллированной воды при нагревании, выливают в ту же колбу и доливают раствором натрия хлорида до метки.

Раствор стоек, с йодом должен давать чисто-синее окрашивание.

Оборудование: приборы (перегонный аппарат, рис. 3) для определения кетоновых тел (20—30 шт.), монтируют в вытяжном шкафу; электроплитки (8—10 шт.); микробюретки на 2 и 5 мл; стаканчики химические на 75—100 мл.

Ход определения. Приготовление безбелкового фильтрата по Сомоджи. К 5 мл крови добавляют 25 мл дистиллированной воды, 10 мл 0,3 моль/л раствора натрия гидроксида, перемешивают, добавляют 10 мл 5%-ного раствора цинка сульфата, все тщательно взбалтывают и через 10 мин фильтруют через бумажный фильтр. Таким образом получим разведение крови 1 : 10.

Определение общего количества кетоновых тел. Непосредственно перед работой включают холодильник и аппарат просасывают 20 мин текучим паром, налив в перегонную колбу дистиллированную воду и добавив в нее немного пемзы для равномерного кипения.

В приемный стаканчик вносят 20 мл дистиллированной воды,

  1. мл 0,01 н. (0,005 моль/л) раствора йода, 2 мл 10%-ного раствора натрия гидроксида и ставят под холодильник перегонного аппарата так, ЧТОбЫ КОнец еГО ПОГРУЗИЛСЯ В ЖИДКОСТЬ. В ПереГОННуЮ КОЛ-

бу вносят 10 мл фильтрата крови, 15 мл бихроматной смеси и 10 мл дистиллированной воды.

Параллельно готовят контроль в двух аппаратах: в перегонную колбу вносят 20 мл дистиллированной воды и 15 мл бихроматной смеси. Приборы закрывают, соединяют холодильники с водопроводом, пускают воду и включают электроплитки. Опытные образцы кипятят 25 мин, контрольные — 15 мин. Затем отключают нагрев, снимают перегонную колбу, холодильник смывают небольшим количеством дистиллированной воды. Приемный стаканчик закрывают крышкой и ставят в темное место на 15—20 мин. По истечении указанного времени в приемный стаканчик быстро приливают 2 мл 20%-ного раствора серной кислоты, добавляют 2—3 капли 1%-ного раствора крахмала и титруют 0,01 моль/л раствором натрия тиосульфата до обесцвечивания.

Расчет ведут по формуле

х=(А- В)- 0,25 • 100,

где х — количество кетоновых тел, мг%; А — количество 0,01 моль/л раствора натрия тиосульфата, пошедшего на титрование свободного йода в контрольной пробе, мл; В — количество 0,01 моль/л раствора натрия тиосульфата, пошедшего на титрование свободного йода в опытной пробе, мл; 1 мл 0,01 моль/л раствора йода связывает в данных условиях 0,25 мг ацетона; 100 — коэффициент перевода в мг%.

Определение ацетона и ацетоуксусной кислоты. В приемный стаканчик вносят 20 мл дистиллированной воды, 2 мл 0,01 моль/л раствора йода, 2 мл 10%-ного раствора натрия гидроксида и ставят

под холодильник перегонного аппарата.

В перегонную колбу вносят 10 мл фильтрата крови, 1 мл 20%-ного раствора серной кислоты и 15 мл дистиллированной воды. Параллельно готовят два контроля: в перегонную колбу вносят 25 мл дистиллированной воды и 1 мл 20%-ного раствора серной кислоты. Закрывают систему, включают электроплитки и кипятят опытные образцы 25 мин, контроль 15 мин.

Последующий ход анализа такой же, как при определении общего количества кетоновых тел.

Расчет ведут по формуле

х = (А — В)' 10,24,

где х — количество ацетона и ацетоуксусной кислоты, мл; А — количество 0,01 моль/л раствора тиосульфата натрия, пошедшего на связывание свободного йода в контроле, мл; В — количество 0,01 моль/л раствора тиосульфата натрия, пошедшего на связывание свободного йода в опыте, мл; 10,24 — коэффициент для перевода в мг%.

  1. мл 0,01 н. раствора йода соответствует 0,1024 мг ацетона. Количество фильтрата в опыте соответствует 1 мл крови, поэтому связанное количество йода, умноженное на 10,24 (0,1024 • 100), будет соответствовать содержанию ацетона и ацетоуксусной кислоты в 100 мл крови.

Определение р-оксимасляной кислоты. В приемный стаканчик вносят те же реактивы, что и для определения общего количества кетоновых тел, ставят его под холодильник. Перегонную колбу после отгонки ацетона и ацетоуксусной кислоты охлаждают и вносят в нее 15 мл бихроматной смеси (не сразу, а в два приема). Закрывают систему, подключают электроплитки. Кипение продолжается 20 мин. Необходимо следить, чтобы кипячение в колбе не прекращалось и жидкость не выкипала (не было потемнения бихромата). Если бихромат из воронки весь вылит, а жидкость выкипает, можно частями долить дистиллированную воду. По истечении 28 мин отсоединяют от холодильника приемную колбу, отключают нагрев. Перегонную колбу и холодильник промывают

  1. 5 мл дистиллированной воды. Приемный стаканчик ставят в темное место на 15 мин.

Контроль. В перегонную колбу вносят 10 мл дистиллированной воды, 15 мл бихромата. Кипятят 25 мин. Титруют 0,01 моль/л раствором натрия тиосульфата, как описано выше.

Расчет ведут по формуле

х = (А - В) ¦ 25,

где х — количество р-оксимасляной кислоты, мл; А — количество 0,01 моль/л раствора натрия тиосульфата, пошедшего на связывание свободного йода в контроле; В — количество 0,01 моль/л раствора натрия тиосульфата, пошедшего на связывание свободного йода в опыте; 25 — коэффициент для перевода в мг%.

Примечания. 1. В лаборатории, где проводят определение кетоновых тел, должен быть чистый, свежий воздух. В этих условиях количество 0,01 моль/л раствора натрия тиосульфата, пошедшего на титрование контрольных проб, должно быть только на 0,1 — 0,15 мл меньше, чем было затрачено его при установлении титра 0,01 н. раствора йода, т. е. на 2 мл должно пойти не менее 1,85—1,90 мл. Проверяют чистоту воздуха следующим образом. Рядом с перегонным аппаратом ставят приемный стаканчик, в который внесено 5 мл дистиллированной воды,

  1. мл 10%-ного раствора натрия гидроксида и 2 мл
  1. 01 н. раствора йода. Смеси дают постоять 20—30 мин, после чего приливают 2 мл 20%-ного раствора серной кислоты, 2—3 капли 1%-ного раствора крахмала и титруют 0,01 моль/л раствором натрия тиосульфата. Если в лаборатории воздух чистый, то на титрование пойдет около 1,85—1,90 мл раствора натрия тиосульфата, при его загрязнении — значительно меньше. 2. Определение кетоновых тел в молозиве (молоке) проводят по описанному выше методу. Предварительно готовят безбелковый фильтрат. Молозиво (молоко) обезжиривают центрифугированием при 3000 мин-1 в течение 30 мин. Пробу с молозивом (молоком) ставят в морозильную камеру холодильника на 20 мин, после чего осторожно отбирают 5 мл обезжиренной жидкости и определяют в ней кетоновые тела так же, как в крови.

 

<< | >>
Источник:   И. П. Кондрахин.   Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: Справочник — М.: Колос,. — 520 с.. 2004

Еще по теме   Определение кетоноиых тел в крови йодометрическим методом.  :

  1.   Экспресс-метод обнаружения ацетоновых тел в сыворотке (плазме) крови. 
  2.   Определение активности а-амилазы в сыворотке крови, моче, дуоденальном содержимом амилоклассическим методом со стойким крахмальным субстратом (метод Каравея).  
  3.   Определение марганца в крови перйодатным методом.  
  4.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗЕРВНОЙ ЩЕЛОЧНОСТИ КРОВИ ДИФФУЗНЫМ МЕТОДОМ ПО И. П. КОНДРАХИНУ  
  5.   Определение общего белка в сыворотке крови рефрактометрическим методом.  
  6.   Метод неферментативного определения лактата и пирувата в одной пробе крови.  
  7.    Флуориметрический метод определения общего тиамина в крови и печени (по Г. Д. Елисеевой).  
  8.   Определение белковых фракций в сыворотке крови турбидимет- рическим (нефелометрическим) методом.  
  9.   Определение свободного аминного азота в сыворотке крови по методу Г. А. Узбекова в модификации 3. С. Чулковой.  
  10.   Определение токоферолов в тканях и сыворотке крови методом колоночной хроматографии. 
  11.   Определение билирубина в сыворотке крови животных по методу Ендрассика—Клеггорна—Грофа в модификации В. И. Левченко и В. В. Влизло. 
  12.   Определение билирубина в сыворотке крови по диазореакции (метод Ендрассика—Клеггорна—Грофа).  
  13.   Определение активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови по гидролизу р-глицерофосфата (метод Бодански).  
  14.   Определение активности сорбитолдещдрогеназы (СДГ) в сыворотке крови по реакции с резорцином (метод Севела—Товарека). 
  15.   Определение витамина Е в сыворотке крови (см. с. 195). Определение церулоплазмина в сыворотке крови.  
  16.   Определение общего рибофлавина в крови.  
  17.   МЕТОДЫ ОБЩЕГО КЛИНИЧЕСКОГО АНАЛИЗА КРОВИ  
  18.   Определение белковых фракций в сыворотке крови. 
  19.   Определение глюкозы в безбелковом фильтрате крови по Сомод- жи.  
  20.   Определение активности пероксидазы (КФ 1.11.1.7) в крови.