<<
>>

  Определение мочевой кислоты в сыворотке крови животных с использованием заводского набора реактивов.  

  Принцип. Мочевая кислота восстанавливает фосфорно-вольфрамовый реактив с образованием комплекса голубого цвета. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации мочевой кислоты.

Реактивы: раствор натрия вольфрамата 10 %-ный; реактив Фолина; раствор натрия карбоната; раствор калибровочный мочевой кислоты 0,3 ммоль/л; раствор серной кислоты 0,35 моль/л.

Оборудование: фотоэлектроколориметр; две кюветы с толщиной слоя 1 см; пипетки; шприц для отбора центрифугата; центрифуга.

Ход определения.

Опытная проба. К 5 мл дистиллированной воды добавляют 0,4 мл сыворотки, 0,2 мл раствора серной кислоты, перемешивают. Затем добавляют 0,2 мл раствора натрия вольфрамата, перемешивают и через 10 мин центрифугируют при 3000 мин-1 15 мин. Отбирают 3 мл центрифугата, последовательно добавляют 0,6 мл натрия карбоната и 0,4 мл реактива Фолина, перемешивают и через 30 мин фотометрируют в кювете с толщиной слоя 1 см против холостой пробы при длине волны 670 нм.

Холостая проба. К 3 мл воды добавляют 0,2 мл раствора серной кислоты, 0,2 мл натрия вольфрамата, 0,6 мл раствора карбоната натрия и 0,4 мл реактива Фолина.

Калибровочная проба. К 5 мл воды добавляют 0,4 мл калибровочного раствора мочевой кислоты, 0,2 мл раствора серной кислоты, 0,2 мл раствора натрия вольфрамата, перемешивают. Через 10 мин отбирают 3 мл и прибавляют 0,6 мл раствора натрия карбоната и 0,4 мл реактива Фолина. Через 30 мин фотометрируют при тех же условиях, что и опытную пробу.

Концентрация мочевой кислоты в сыворотке крови (х, ммоль/л, л) составит

   

Концентрация мочевой кислоты в сыворотке крови (х, ммоль/л, л) составит


где Е0П — экстинкция опытной пробы; Ек — экстинкция калибровочной пробы; 0,3 — концентрация мочевой кислоты в калибровочном растворе, ммоль/л.

При переводе в мг% полученную величину в ммоль/л умножают на 16,94.

Источник: 43.

Клиническое значение.

Мочевая кислота у птиц, а также у человека является конечным продуктом обмена пуриновых нуклеиновых оснований, у лошадей, собак и кроликов она окисляется с образованием алантоина. Мочевая кислота плохо растворима в воде, ее соли — ураты откладываются на висцеральных оболочках брюшины, внутренних органов, в суставах и мочевыводящих путях, вызывая мочекислый диатез, а при отложении в суставах — подагру. Мочекислый диатез и подагра преимущественно встречаются у птиц и человека.

В норме мочевой кислоты у кур содержится 0,23—0,47 ммоль/л, или 4—8 мг/100 мл мочевой кислоты. Повышение ее уровня в сыворотке крови у кур отмечается при избыточном протеиновом и аминокислотном кормлении, избытке нитратов, недостатке витамина А и др.

Определение креатинина в сыворотке крови по цветной реакции Яффе (метод Лоппера). Принцип. Креатинин реагирует с пикриновой кислотой в щелочной среде с образованием окрашенных соединений. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации креатинина.

Реактивы: насыщенный раствор пикриновой кислоты. Влажность товарной пикриновой кислоты 15—20 %. Кислоту не сушат! Взрывоопасна! 2 г пикриновой кислоты растворяют в 100 мл горячей (70—80 °С) дистиллированной воды при нагревании в водяной бане. Раствор оставляют стоять на 24 ч, периодически перемешивая, затем фильтруют. Реактив стоек. Хранят в темной посуде;

0,1 моль/л НС1;

основной калибровочный раствор креатинина, 10 моль/л: 113 мг креатинина доводят до 100 мл 0,1 моль/л раствором НС1. Хранят в холодильнике в посуде с притертой пробкой. Рабочий калибровочный раствор получают разведением основного калибровочного раствора дистиллированной водой в 100 раз. 1 мл раствора содержит 0,1 ммоль/л (1 мг%) креатинина;

натрия гидроксид, 2,5 моль/л (10%-ный раствор).

Оборудование: фотоэлектроколориметр; водяная баня; колбы мерные.

Ход определения. Опытная проба. 2,0 мл сыворотки смешивают с 6,0 мл насыщенного раствора пикриновой кислоты.

Через 5 мин пробирку помещают на 15—20 с в кипящую водяную баню, затем центрифугируют или фильтруют. К 4 мл центрифугата добавляют 0,2 мл 2,5 моль/л раствора натрия гидроксида и тщательно перемешивают. Иногда после подщелачивания раствор мутнеет вследствие выпадения фосфатов. В этом случае его следует еще раз отцентрифугировать. Затем раствор доводят до объема 10 мл дистиллированной водой. Через 10 мин (не позже) измеряют на ФЭКе в кювете с толщиной слоя 2 см при длине волны 500—560 нм (зеленый светофильтр) против холостой пробы.

Холостая проба. 3 мл насыщенного раствора пикриновой кислоты и 0,2 мл 2,5 ммоль/л раствора натрия гидроксида доводят до объема 10 мл водой.

Калибровочную пробу обрабатывают точно так же, как и опытную, но вместо сыворотки крови берут 2 мл рабочего 0,1 ммоль/л (1 мг%) раствора креатинина; пробу при этом не центрифугируют. Можно строить калибровочный график. Из рабочего калибровочного раствора креатинина готовят разведения, как указано в таблице 15.

  1. Разведения рабочего калибровочного раствора креатинина

1

0,4

3,0

0,2

До объема 10 мл

40

2

0,8

3,0

0,2

То же

80

3

1,6

3,0

0,2

»

160

4

2,4

3,0

0,2

»

240

5

3,2

3,0

0,2

»

320

Концентрация креатинина в пробе, мкмоль/л

Через 10 мин проводят измерения при тех же условиях, что и опытные пробы. Калибровочная кривая линейна до 260 мкмоль/л креатинина.

Расчет концентрации креатинина в сыворотке ведут по формуле

X = ^ • 0,1 или ^ • 1,

Ек              Ек

где х — содержание креатинина в сыворотке, ммоль/л или мг%; Еоп — экстинкция опытной пробы; Ек — экстинкция калибровочной пробы; 0,1 концентрация креатинина в калибровочной пробе, ммоль/л; 1 — концентрация креатинина в калибровочной пробе, мг%.

При переводе в мг% полученную величину умножают на 10.

Источник: 43.

Клиническое значение. В организме животных кре- атинин образуется из креатина, источники которого аминокислоты аргинин, глицин, метионин. Креатин при фосфорилировании превращается в креатинфосфат, а затем в креатинин. Креатин и креатинфосфат участвуют в процессах, связанных с мышечными сокращениями.

В сыворотке крови содержится в основном креатинин, поэтому его и определяют. Количество его у животных различных видов колеблется от 40 до 160 мкмоль/л (0,45—1,9 мг%), у кур — 120—350 мкмоль/л (1,4—4,0 мг%).

Повышение концентрации креатинина в крови наблюдается при почечной недостаточности, прогрессирующих диффузных заболеваниях почек, закупорке мочевых путей, подагре, кишечной не

проходимости, механической желтухе, голодании, мышечной дистрофии.

Понижение количества креатинина не имеет клинического значения.

 

<< | >>
Источник:   И. П. Кондрахин.   Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: Справочник — М.: Колос,. — 520 с.. 2004

Еще по теме   Определение мочевой кислоты в сыворотке крови животных с использованием заводского набора реактивов.  :

  1.   Определение мочевой кислоты в сыворотке крови по реакции с фосфорно-вольфрамовым реактивом. 
  2.   Определение активности у-глутамилтранспептидазы (у-глута- милтрансферазы) в сыворотке крови с помощью набора реактивов.  
  3.   Определение сиаловых кислот в сыворотке крови по реакции с резорцином. 
  4.     Определение нитритов в кормах, крови и патологическом материале с использованием реактива Грисса.  
  5.   Определение нитратов в кормах, крови, молоке и патологическом материале с использованием реактива Грисса.  
  6.   Определение неорганического фосфора в сыворотке крови с ва- надат-молибденовым реактивом (по Пулсу в модификации В. Ф. Коромыслова и Л. А. Кудрявцевой).  
  7.   Определение содержания неэтерифицированных жирных кислот (НЭЖК) в сыворотке (плазме) крови (по Лауреллу и Тибблингу).  
  8.   Определение активности креатинкииазы (КК) в сыворотке (плазме) крови с использованием креатинфосфата в качестве субстрата. 
  9.   Определение витамина Е в сыворотке крови (см. с. 195). Определение церулоплазмина в сыворотке крови.  
  10.   Определение билирубина в сыворотке крови животных по методу Ендрассика—Клеггорна—Грофа в модификации В. И. Левченко и В. В. Влизло. 
  11.   Определение белковых фракций в сыворотке крови. 
  12.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТЕСТОСТЕРОНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ (DIAGNOSTICAUTOMATIONINC., США)  
  13.   Определение общего кальция в сыворотке крови комплексоном Арсеназо III.  
  14.   Определение мочевины в сыворотке крови по цветной реакции с диацетилмонооксимом.  
  15.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИНСУЛИНА В СЫВОРОТКЕ (ПЛАЗМЕ) КРОВИ (DIAGNOSTICSYSTEMLABORATORY, США)