<<
>>

  Определение молочной кислоты по реакции с параоксидифени- лом. 

  Принцип. Из молочной кислоты в присутствии серной, фосфорной кислот и солей меди образуется уксусный альдегид, который, реагируя с параоксидифенилом (С6Н5С6Н4ОН), дает фи- олетово-окрашенные продукты. Реакция очень чувствительная, поэтому нужно строго выдерживать все условия выполнения исследования. В пробирку для взятия крови добавляют смесь ЭДТА и натрия фторида. Кровь немедленно охлаждают. Анализ проводят быстро.

Реактивы: концентрированная серная кислота, выдерживающая пробу Саваля (х.

ч., плотность 1,84), от ее качества зависит возможность выполнения анализа, иногда качество кислоты можно улучшить, нагревая ее и по каплям добавляя в нагретую кислоту пероксид водорода;

смесь из 3 г меди сульфата (СаБ04 • 5НгО, ч. д. а., х. ч.) и 9 мл орфтофосфорной кислоты (Н3РО4, ч. д. а., х. ч.), через некоторое время должен образоваться гомогенный раствор;

  1. %-ный раствор параоксидифенила (С6Н5С6Н4ОН) в диме- тилформамиде. Растворяют 15 мг параоксидифенила в 1 мл диме- тилформамиде;
  1. %-ная трихлоруксусная кислота (0,3 н.).

Ход определения. 0,02 мл крови вносят в 1 мл 5 %-ной трихлоруксусной кислоты. Через несколько минут центрифугируют 15 мин при 3000 мин *. К 0,2 мл центрифугата прибавляют 0,1 мл смеси медного купороса и ортофосфорной (фосфорной) кислоты и 2,5 мл концентрированной серной кислоты. Энергично встряхивают и точно через 3 мин ставят ровно на 3 мин в кипящую водяную баню, затем еще 3 мин охлаждают в ледяной воде. Добавляют 1 каплю раствора параоксидифенила в диметилформамиде, капля должна сразу попасть в центр пробирки. Встряхивают и оставляют стоять 10 мин при комнатной температуре. После этого нагревают на кипящей водяной бане 1,5 мин, охлаждают в воде и фотометрируют при длине волны 565 нм.

Одновременно ставят холостой опыт, в котором вместо безбел- кового фильтрата применяют 5%-ный раствор трихлоруксусной кислоты, и калибровочные пробы, в которые берут растворы ТХУ, содержащие в 0,2 мл 2—20 нмоль молочной кислоты или молочнокислого лития. Их обрабатывают так же, как опытные. Окраска калибровочной пробы, в которой взято 2 нмоля молочной кислоты, соответствует пробе с содержанием 0,5 ммоль/л; соответственно окраска пробы, содержащей 20 нмоль, соответствует концентрации 5 ммоль/л.

Источник: 43.

Примечание. Метод определения молочной кислоты по Баркеру и Саммерсону изложен в книге «Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии»: Справочник / И. П. Кондрахин, Н. В. Курилов, А. Г. Малахов и др. — М.: Агропромиздат, 1985. — С. 88—90.

Клиническое значение. Молочная кислота образуется при распаде гликогена и глюкозы, ее источником также служит пирувит. В норме содержание молочной кислоты у животных колеблется в пределах 0,295—0,760 ммоль/л (см. приложение 5).

Повышение содержания молочной кислоты (гиперлактатемия) отмечается при ацидозе рубца, поедании животными большого количества свеклы, зеленой массы кукурузы молочно-восковой спелости, зерновых злаковых, содержащих много крахмала. Бывает при миоглобинурии, диабете, эндемической остеодистрофии бычков, интенсивном их выращивании и откорме, когда болезнь сопровождается ацидозом рубца и всасыванием в кровь большого количества молочной кислоты. Повышение концентрации лактата в крови может быть обусловлено поражением печени, кислородной недостаточностью (гипоксия), чрезмерной физической нагрузкой, местным нарушением кровообращения.

 

<< | >>
Источник:   И. П. Кондрахин.   Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: Справочник — М.: Колос,. — 520 с.. 2004

Еще по теме   Определение молочной кислоты по реакции с параоксидифени- лом. :

  1.   Определение сиаловых кислот в сыворотке крови по реакции с резорцином. 
  2.   Определение мочевой кислоты в сыворотке крови по реакции с фосфорно-вольфрамовым реактивом. 
  3. Определение алкалоидов качественными реакциями
  4. Определение растворимых углеводов фотометрически с пикриновой кислотой
  5.   Определение пировиноградной кислоты по модифицированному методу Фреедмана и Хаугена. 
  6.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО КОЛИЧЕСТВА ЛЕТУЧИХ ЖИРНЫХ КИСЛОТ (ЛЖК)  
  7. Определение мышьяка по Зангер-Блеку (качественная реакция)
  8.   Определение мочевой кислоты в сыворотке крови животных с использованием заводского набора реактивов.  
  9.   Определение мочевины в сыворотке крови по цветной реакции с диацетилмонооксимом.  
  10.   Определение железа в сыворотке крови по цветной реакции с сульфонированным (3-фенантролином.  
  11. 3. Определение видов и форм минеральных удобренийпо качественным реакциям
  12.   Определение диеновых конъюгатов и кетодиенов полиненасы- щениых жирных кислот в крови. 
  13.   Определение содержания неэтерифицированных жирных кислот (НЭЖК) в сыворотке (плазме) крови (по Лауреллу и Тибблингу).  
  14.   Определение активности сорбитолдещдрогеназы (СДГ) в сыворотке крови по реакции с резорцином (метод Севела—Товарека). 
  15.   Определение магния в сыворотке (плазме) крови по цветной реакции с титановым желтым (по Кункелю, Пирсону, Швейгерту в модификации И. В. Петрухина). 
  16. Молочная железа