<<
>>

  Определение нитратов в кормах, крови, молоке и патологическом материале с использованием реактива Грисса.  

  Принцип. Метод основан на извлечении нитратов из проб дистиллированной водой, восстановлении их до нитритов металлическим цинком в растворе уксусной кислоты и взаимодействии последних с реактивом Грисса с образованием азосоединения розово-красного цвета.
Реакция специфична для нитратов. Чувствительность определения 40 мкг нитрат-ионов в пробе.

Реактивы: сульфаниловая кислота (ч. д. а.);

  1. нафтиламин (а-нафтиламин, ч. д. а.);

уксусная кислота концентрированная (х. ч.);

калия нитрат (К1ЧОз, х. ч.);

цинковая пыль;

марганца сульфат (ч. д. а.);

реактив Грисса: а) 0,5 г сульфаниловой кислоты растворяют в 150 мл 12%-ного раствора уксусной кислоты; б) 0,1 г а-нафтила- мина растворяют при нагревании в 20 мл дистиллированной воды, фильтруют и смешивают со 150 мл 12%-ного раствора уксусной кислоты. Растворы «а» и «б» хранят отдельно в холодильнике в течение 2 мес. Перед употреблением их смешивают 1:1;

калибровочный раствор калия нитрата основной. Растворяют 1,630 г калия нитрата, высушенного до постоянной массы при 105 °С в дистиллированной воде в мерной колбе на 1 л и доводят

объем раствора до метки дистиллированной водой. 1 мл этого раствора содержит 1 мг нитрат-ионов (ЫОз). Хранят в холодильнике в течение 3 мес;

рабочий калибровочный раствор калия нитрата. В мерную колбу на 100 мл переносят 20 мл калибровочного раствора калия нитрата и доводят объем до метки дистиллированной водой. 1 мл этого раствора содержит 0,2 мг (200 мкг) нитрат-ионов (ЫОз). Готовят перед анализом.

Оборудование: фотоэлектроколориметр; химические пробирки; пипетки на 1, 5, 10, 20 мл; мерные колбы на 100 и 1000 мл; конические колбы; химические стаканы; цилиндры на 10, 50 и 100 мл; мешочки или пленка для диализа.

Ход определения.

Для исследования берут 10 г измельченного растительного или патологического материала, такое же количество гепаринизированной крови (молока). Извлечение нитратов из проб крови, молока, патологического материала и кормов, дающих при извлечении окрашенные растворы, проводят методом диализа. Для этого измельченные пробы (сухие пробы предварительно смачивают) помещают в мешочки или пленку для диализа и погружают в стаканчики или колбы с 50 мл дистиллированной воды на 2 ч. Затем диализат фильтруют в калиброванный сосуд, а мешочек с пробой еще раз погружают в 20 мл дистиллированной воды на 30 мин в тот же сосуд. Затем мешочки с пробами вынимают, диализат фильтруют и объединяют с первым, доводя его объем до 100 мл. 6 мл диализата отбирают в пробирку для анализа на нитраты. При малом содержании нитратов в пробе диализат концентрируют до небольшого объема, фильтруют его, измеряют объем и берут 6 мл для анализа.

Для извлечения нитратов из проб растительного материала, образующих неокрашенные растворы, измельченные пробы помещают в конические колбы и наливают 50 мл дистиллированной воды. Извлечение проводят 1 ч, часто встряхивая колбы. Затем раствор фильтруют, пробу еще раз смывают 20—30 мл дистиллированной водой и объединяют с первой частью фильтрата, пропуская через тот же фильтр. Далее поступают так же, как описано выше.

В пробирку с 6 мл анализируемого фильтрата приливают 2 мл 10%-ной уксусной кислоты и вносят на кончике скальпеля смесь цинковой пыли с марганца сульфатом (1 г цинковой пыли предварительно тщательно перемешивают со 100 г марганца сульфата). Пробирку встряхивают 30 с. Затем приливают 1 мл реактива Грисса, перемешивают содержимое пробирки и через 10 мин колориметрируют на ФЭКе при длине волны 536 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 10 мм против дистиллированной воды. Оптическую плотность окрашенного раствора оп-

ределяют только при наличии прозрачного и бесцветного фильтрата.

Расчет ведут по калибровочной кривой.

Для составления шкалы стандартов в 8 химических пробирок наливают рабочий раствор в количестве, указанном в таблице 38.

38. Приготовление стандартных растворов

про

бир

ки

Калибровочный раствор калия нитрата рабочий, мл

Вода дистиллированная, мл

Содержание N0^ , мг

про

бирки

Калибровочный раствор калия нитрата рабочий, мл

Вода дистиллированная, мл

Содер

жание

N03“ ,

мг

1

0,0

6,0

0,00

5

1,0

5,0

0,2

2

0,2

5,8

0,04

6

1,5

4,5

0,3

3

0,3

5,7

0,06

7

2,0

4,0

0,4

4

0,5

5,5

0,10

8

3,0

2,0

0,6

В каждую из пробирок приливают по 2 мл 10%-ного раствора уксусной кислоты и вносят на кончике скальпеля (не более 30 мг) цинковую пыль с марганца сульфатом. Далее проводят все операции так же, как описано для опытных проб.

Для построения калибровочной кривой определяют оптическую плотность растворов в 8 пробирках так же, как при определении опытных проб.

Затем на оси абсцисс откладывают количество нитрат-ионов (мг), а на оси ординат — найденные значения оптической плотности растворов.

Расчет ведут по формуле

У, В-1000

  • =               *             

где х — содержание нитратов (нитрат-ионов), мг/кг; V/ — общий объем фильтрата, мл; В — содержание нитрат-ионов, найденное по калибровочной кривой, мг; 1000 — коэффициент для пересчета на 1 кг; У2 — объем фильтрата, взятый для анализа, мл; Я — масса навески анализируемого образца, г.

При необходимости пересчета в калия нитрат (мг/кг) найденное количество нитрат-ионов следует умножить на 1,6.

Для выражения нитратов в мг% (мг/100 мл) пользуются формулой

у. В-100

  • =               1             

Обозначения те же, что указаны в предыдущей формуле; 100 — коэффициент для пересчета в проценты.

Пересчет результата на абсолютно сухое вещество проводят по формуле

у = *100

1 100-И'’

где X] — содержание N—N03, мг/кг сухого вещества; х — содержание И—N03 в анализируемом материале, мг/кг; 100 — коэффициент для пересчета в проценты; IV — влажность материала, %; 100 — IV — сухое вещество анализируемого материала, %.

Если необходимо рассчитать содержание нитратного азота в процентах на абсолютно сухое вещество корма, пользуются формулой

Х| = * 100              или               ?             

1 (100-И0-10 000’ (100- «0-100’

где х1 — содержание N—N03 в сухом веществе, %; х — содержание N—N03 в анализируемом материале, мг/кг; 100 — коэффициент для пересчета в проценты; IV — влажность анализируемого материала, %; (100 - IV) — сухое вещество анализируемого материала.

 

<< | >>
Источник:   И. П. Кондрахин.   Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: Справочник — М.: Колос,. — 520 с.. 2004

Еще по теме   Определение нитратов в кормах, крови, молоке и патологическом материале с использованием реактива Грисса.  :

  1.     Определение нитритов в кормах, крови и патологическом материале с использованием реактива Грисса.  
  2.   Определение мочевой кислоты в сыворотке крови животных с использованием заводского набора реактивов.  
  3.   Определение цинка фосфида в патологическом материале  
  4.   МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАТРИЯ ХЛОРИДА В ПАТОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ (ПО А. Ф. БАШМУРИНУ, 1968)  
  5.   Определение мочевой кислоты в сыворотке крови по реакции с фосфорно-вольфрамовым реактивом. 
  6.   Определение активности у-глутамилтранспептидазы (у-глута- милтрансферазы) в сыворотке крови с помощью набора реактивов.  
  7.   Определение неорганического фосфора в сыворотке крови с ва- надат-молибденовым реактивом (по Пулсу в модификации В. Ф. Коромыслова и Л. А. Кудрявцевой).  
  8.   Определение активности креатинкииазы (КК) в сыворотке (плазме) крови с использованием креатинфосфата в качестве субстрата. 
  9. Определение соединений азота в почве, воде и кормах
  10. Обнаружение фтора в патологическом материале с помощью ализарин- циркониевого лака
  11. Определения содержания нитратов в растительной продукции.
  12.   КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ НИТРАТОВ И НИТРИТОВ (ПО Е. С. КОВАЛЕВОЙ, 1985)
  13. 2.3. Определение содержания нитратов в почве по Грандваль- Ляжу