<<
>>

    Определение нитритов в кормах, крови и патологическом материале с использованием реактива Грисса.  

  Принцип. Метод основан на извлечении нитритов из проб дистиллированной водой и взаимодействии их с а-нафтиламином и сульфаниловой кислотой в кислой среде с образованием азосоединения розово-красного цвета.

Реактивы: сульфаниловая кислота (ч.

д. а.);

а-нафтиламин (1-нафтиламин, ч. д. а.);

уксусная кислота концентрированная (х. ч.);

натрия нитрат (№N02, х- ч-)1

реактив Грисса: а) 0,5 г сульфаниловой кислоты растворяют в 150 мл 12%-ного раствора уксусной кислоты; б) 0,1 г а-нафтила- мина растворяют при нагревании в 20 мл дистиллированной воды, фильтруют и смешивают со 150 мл 12%-ного раствора уксусной кислоты. Перед употреблением одну часть раствора «а» смешивают с равной по объему частью раствора «б». Растворы «а» и «б» хранят отдельно;

калибровочный раствор натрия нитрита основной. 0,15 г высушенного при температуре 70—80 °С №N02 растворяют в 1 л дистиллированной воды. Раствор хранят в холодильнике, он устойчив в течение 1 мес. 1 мл этого раствора содержит 0,1 мг N0^;

рабочий калибровочный раствор натрия нитрита. 25 мл калибровочного раствора натрия нитрита основного переносят в мерную колбу на 500 мл и доводят объем до метки дистиллированной водой. Раствор^должен быть свежеприготовленным. 1 мл содержит 0,005 мг N02- Этот раствор используют для построения калибровочной кривой.

Оборудование: фотоэлектроколориметр; химические пробирки; пипетки на 1 и 10 мл; мерные колбы на 500 и 1000 мл; конические колбы; химические стаканы; мешочки или пленка для диализа; цилиндры на 10, 50 и 100 мл.

Ход определения. Для исследования берут 10 г измельченного растительного или животного материала, цельной крови (молока). В качестве антикоагулянта крови используют 1 %-ный раствор гепарина. Пробы растительного происхождения, образующие при извлечении нитритов неокрашенные растворы, переносят в конические колбы и заливают 50 мл дистиллированной воды.

Нитриты извлекают в течение 1 ч, часто встряхивая содержимое колбы. Затем раствор фильтруют, пробу еще раз смывают 30 мл дистиллированной воды, объединяют эту часть раствора с первой, пропуская через тот же фильтр. Доводят объем до 100 мл и берут 10 мл для анализа на нитриты.

Извлечение нитритов из проб крови, молока, патологического материала и кормов растительного происхождения проводят методом диализа. Для этого измельченные пробы кормов, органов и тканей или пробы крови (молока) помещают в мешочки или пленку для диализа и погружают в сосуд с 50 мл дистиллированной воды на 2 ч. Затем диализат фильтруют в калиброванный сосуд, а мешочек с пробой еще раз погружают в 20 мл дистиллированной воды на 30 мин в тот же сосуд. Этот диализат, фильтруя, объединяют с первым, доводя объем фильтрата до 100 мл дистиллированной водой. 10 мл фильтрата отбирают в пробирку для анализа на нитриты.

В пробирку с 10 мл анализируемого фильтрата добавляют 0,5 мл реактива Грисса и через 15 мин определяют оптическую плотность анализируемого раствора на ФЭКе при длине волны 536 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 10 мм против дистиллированной воды.

пробирки

Раствор

натрия

нитрита,

мл

Дистиллирован- ная вода, мл

Содержание N0^ ’ мг

пробирки

Раствор

натрня

нитрита,

мл

Дистиллированная вода, мл

Содержание NOj , мг

1

0,2

9,8

0,001

6

1,2

8,8

0,006

2

0,4

9,6

0,002

7

1,4

8,6

0,007

3

0,6

9,4

0,003

8

1,6

8,4

0,008

4

0,8

9,2

0,004

9

1,8

8,2

0,009

5

1,0

9,0

0,005

10

2,0

8,0

0,010

Расчет ведут по калибровочной кривой. Для составления шкалы стандартов в 10 пробирок вносят рабочий калибровочный раствор натрия нитрита в количествах, указанных в таблице 39.

В каждую пробирку вносят по 0,5 мл реактива Грисса.

Через 15 мин после развития окраски определяют оптическую плотность в первых семи пробирках. На оси абсцисс откладывают количество N0^ в мгgt; а на оси ординат — найденные значения оптической плотности растворов. Оптическую плотность определяют только при наличии прозрачного и бесцветного фильтратов. В противном случае возможно только визуальное определение (сравнение опытной пробирки со стандартной шкалой).

Расчет ведут по формуле

у,в¦ юоо *= “1уГ" ’

где х — содержание нитритов (нитрит-ионов), мг/кг; Уу — общий объем фильтрата, мл; В — содержание нитрит-ионов, найденное по калибровочной кривой, мг; 1000 — коэффициент пересчета на 1 кг; У2 — объем фильтрата, взятый для анализа, мл; Н — масса навески анализируемого образца, г.

При необходимости пересчета в натрия нитрит (мг/кг) найденное количество нитрит-ионов умножают на коэффициент 1,5.

Если необходимо величину выразить в мг%, то в приведенной формуле берут коэффициент не 1000, а 100.

Клиническое значение. При внесении в почву больших доз азотных удобрений (более 200—300 кг действующего вещества на 1 га) или ненормированного количества жидкого навоза соли азотной кислоты — нитраты не используются полностью растениями на синтез аминокислот и растительного белка и накапливаются в них в концентрациях, вредных для животных и человека.

В процессе использования растениями нитратов образуются промежуточные продукты — нитриты и аммиак, которые значительно токсичнее исходного вещества — нитратов. Поступление в кровь нитритов и нитратов ведет к образованию метгемоглобина, кислородному голоданию, нарушению окислительно-восстанови- тельных процессов и обмена веществ. У жвачных животных нитраты в рубце распадаются до нитритов и аммиака с последующим использованием азота этих метаболитов для синтеза аминокислот и бактериального белка. При значительном поступлении с кормом нитратов образовавшиеся из них нитриты и аммиак не успевают использоваться микрофлорой рубца и всасываются в кровь, вызывая нарушение обмена веществ и токсикоз.

Для животных токсичной концентрацией нитратов в кормах считают 0,21—0,52 % сухого вещества корма.

Наибольшая концентрация нитратов бывает в корнеплодах, бахчевых культурах, зеленой массе кукурузы, ржи, пшенице, овсе, траве многолетних культурных пастбищ при внесении под эти культуры больших доз азотных минеральных удобрений или навоза.

Концентрация нитратов и нитритов в растениях снижается, не достигает токсичной при внесении азотных удобрений дробными дозами в 2—3 приема за сезон, а также при организации регулярного полива.

По нашим данным, содержание нитратов и нитритов снижается в процессе провяливания и сушки трав, силосования зеленой массы. В засушливые годы при нерегулярном поливе содержание нитритов и нитратов в растениях повышается. При поступлении в организм животных больших доз нитратов и нитритов помимо резкого повышения содержания метгемоглобина отмечаются падение уровня гемоглобина до 70 г/л и ниже, повышение общего белка сыворотки крови до 89 г/л и более, положительная коллоидно-осадочная проба. У здоровых животных при умеренном поступлении с кормом нитратов в крови и молоке их не обнаруживают или находят в следовых количествах. При развитии токсикоза содержание нитратов в крови повышается и составляет 30—60 мг/л и более, их находят в определенном количестве в молоке. Максимально допустимые уровни нитратов и нитритов в кормах и воде приведены в таблице 40.

 

<< | >>
Источник:   И. П. Кондрахин.   Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: Справочник — М.: Колос,. — 520 с.. 2004

Еще по теме     Определение нитритов в кормах, крови и патологическом материале с использованием реактива Грисса.  :

  1.   Определение нитратов в кормах, крови, молоке и патологическом материале с использованием реактива Грисса.  
  2.   Определение мочевой кислоты в сыворотке крови животных с использованием заводского набора реактивов.  
  3.   Определение цинка фосфида в патологическом материале  
  4.   МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАТРИЯ ХЛОРИДА В ПАТОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ (ПО А. Ф. БАШМУРИНУ, 1968)  
  5.   Определение мочевой кислоты в сыворотке крови по реакции с фосфорно-вольфрамовым реактивом. 
  6.   Определение активности у-глутамилтранспептидазы (у-глута- милтрансферазы) в сыворотке крови с помощью набора реактивов.  
  7.   Определение неорганического фосфора в сыворотке крови с ва- надат-молибденовым реактивом (по Пулсу в модификации В. Ф. Коромыслова и Л. А. Кудрявцевой).  
  8.   Определение активности креатинкииазы (КК) в сыворотке (плазме) крови с использованием креатинфосфата в качестве субстрата. 
  9.   КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ НИТРАТОВ И НИТРИТОВ (ПО Е. С. КОВАЛЕВОЙ, 1985)
  10. Определение соединений азота в почве, воде и кормах
  11. Обнаружение фтора в патологическом материале с помощью ализарин- циркониевого лака
  12. Определение тяжелых металлов в почве, воде и кормах
  13.   Количественное определение афлатоксинов В( и G( в кормах. Метод разработан Н. А. Соболевой.  
  14.   Определение витамина Е в сыворотке крови (см. с. 195). Определение церулоплазмина в сыворотке крови.  
  15. Определение сапонинов в растениях и кормах (гемолитическая проба)
  16.   Определение восстановленного глутатиона в крови.  
  17.   Определение общего рибофлавина в крови.  
  18.   Определение белковых фракций в сыворотке крови.