<<
>>

  Определение сиаловых кислот в сыворотке крови по реакции с резорцином. 

  Принцип. При добавлении трихлоруксусной кислоты к сыворотке крови и нагревании происходит мягкий гидролиз гликопротеидов с отщеплением нейроминовой кислоты, которая затем вступает в реакцию с раствором резорцина в соляной кислоте с образованием хромогена синего цвета.

Реактивы: резорциновый реактив. Реактив готовят в мерной колбе на 100 мл. 200 мг резорцина растворяют в 10 мл дистиллированной воды, добавляют 80 мл концентрированной соляной кислоты (плотность 1,19) и 0,25 мл 0,1 моль/л раствора меди сульфата, смешивают, объем доводят дистиллированной водой до 100 мл.

Реактив можно использовать через 4 ч после приготовления. Годен в течение 1 мес при хранении в холодильнике;

реактив для экстракции. 85 мл бутилацетата смешивают с 15 мл бутилового спирта;

5%-ный раствор трихлоруксусной кислоты;

основной калибровочный раствор. 50 мг%-ный водный раствор И-ацетилнейраминовой кислоты. 0,5 мг кристаллической Ы-аце- тилнейраминовой кислоты (мол. масса 309) растворяют в 1 мл воды.

  1. мл основного калибровочного раствора содержит 0,5 мг N-ацетил- нейраминовой кислоты.

Оборудование: фотоэлектроколориметр; водяная баня.

Ход определения. К0,1мл сыворотки или плазмы крови добавляют 1,9 мл 5%-ного раствора трихлоруксусной кислоты, перемешивают и помещают в кипящую водяную баню на 7 мин (точно). Охлаждают в проточной воде до комнатной температуры, фильтруют через бумажный фильтр. К 0,5 мл прозрачного фильтрата (соответствует 0,025 мл сыворотки) добавляют 0,5 мл дистиллированной воды. В каждую пробирку вносят по 1 мл резорцинового реактива, закрывают стеклянными пробками и помещают на 15 мин в кипящую водяную баню (пробирки закрывают пробками для уменьшения испарения), охлаждают проточной водой, добавляют по 3 мл раствора для экстракции, встряхивают, оставляют на 15 мин для расслоения фаз. Верхний окрашенный слой отсасывают и измеряют на ФЭКе при длине волны 575—590 нм (желтый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 0,5 см против контроля.

Контроль. К 1 мл дистиллированной воды прибавляют 1 мл резорцинового реактива, помещают на 15 мин в кипящую водяную баню, охлаждают в проточной воде до комнатной температуры, добавляют 3 мл раствора для экстракции, встряхивают, отсасывают верхний слой, который используют в качестве контроля.

Для построения калибровочного графика готовят разведения (рабочий раствор) из основного калибровочного раствора И-аце- тилнейраминовой кислоты (табл. 19).

19. Разведения для построения калибровочного графика

0,1

0,9

50

162

200

0,65

0,2

0,8

100

324

400

1,29

0,3

0,7

150

485

600

1,94

0,4

0,6

200

647

800

2,59

0,5

0,5

250

809

1000

3,24

Основной раствор Л'-ацетилнейрамино- вой кислоты, мл

Вода, мл

Содержание в 1 мл

Концентрация в плазме

мг/л

ммоль/л

Из каждого рабочего калибровочного раствора с указанной концентрацией берут по 1 мл, добавляют по 1 мл резорцинового реактива и далее обрабатывают так же, как опытные пробы. Расчет ведут по калибровочному графику.

Клиническое значение. Сиаловые кислоты являются N-ацетильными производными нейраминовой кислоты, играющей важную роль в качестве строительных блоков структурных полисахаридов. Нейраминовая кислота представляет собой производное девятиуглеродной сахарной кислоты. Ее можно рассматривать как продукт присоединения шестиуглеродного аминосахара к трехуглеродной сахарной кислоте. Нейраминовая кислота и ее производные — сиаловые кислоты в свободном состоянии присутствуют в крови, ликворе, слюне и других биологических субстратах.

Содержание нейраминовых кислот в сыворотке крови резко возрастает при многих инфекционных заболеваниях, раковых опухолях, лейкозах, дистрофических и воспалительных процессах в почках (нефроз, нефрит) и печени (гепатоз), а также при поражении соединительной ткани (коллагенозы) и сердечной мышцы.

Источник'. 43.

 

<< | >>
Источник:   И. П. Кондрахин.   Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: Справочник — М.: Колос,. — 520 с.. 2004

Еще по теме   Определение сиаловых кислот в сыворотке крови по реакции с резорцином. :

  1.   Определение активности сорбитолдещдрогеназы (СДГ) в сыворотке крови по реакции с резорцином (метод Севела—Товарека). 
  2.   Определение мочевой кислоты в сыворотке крови по реакции с фосфорно-вольфрамовым реактивом. 
  3.   Определение мочевины в сыворотке крови по цветной реакции с диацетилмонооксимом.  
  4.   Определение мочевой кислоты в сыворотке крови животных с использованием заводского набора реактивов.  
  5.   Определение железа в сыворотке крови по цветной реакции с сульфонированным (3-фенантролином.  
  6.   Определение содержания неэтерифицированных жирных кислот (НЭЖК) в сыворотке (плазме) крови (по Лауреллу и Тибблингу).  
  7.   Определение магния в сыворотке (плазме) крови по цветной реакции с титановым желтым (по Кункелю, Пирсону, Швейгерту в модификации И. В. Петрухина). 
  8.   Определение витамина Е в сыворотке крови (см. с. 195). Определение церулоплазмина в сыворотке крови.  
  9.   Определение молочной кислоты по реакции с параоксидифени- лом. 
  10.   Определение белковых фракций в сыворотке крови. 
  11.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТЕСТОСТЕРОНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ (DIAGNOSTICAUTOMATIONINC., США)  
  12.   Определение свободного аминного азота в сыворотке крови по методу Г. А. Узбекова в модификации 3. С. Чулковой.  
  13.   Определение общего кальция в сыворотке крови комплексоном Арсеназо III.