<<
>>

  Определение содержания Р-липопротеидов в сыворотке (плазме) крови (по Бурштейну в модификации Виноградовой).  

  Липопротеиды (ЛП) сыворотки крови играют важную роль в жизнедеятельности организма. Они обеспечивают транспорт липидов как экзогенного (кормового) происхождения, так и синтезированных в печени и стенке тонкого кишечника (т.
е. эндогенного происхождения) в систему циркуляции и далее к местам утилизации или депонирования; входят в состав клеточных мембран и ферментов; обезвреживают токсины; влияют на функцию свертывания крови и т. д.
Важнейшей физиологической функцией отдельных ЛП (а-ЛП) является удаление избытка свободного холестерина из клеток периферических тканей и обратный транспорт их в печень, где он окисляется в желчные кислоты и с желчью через кишечник выводится из организма. Наконец, ЛП осуществляет транспорт жирорастворимых витаминов, в том числе обладающих антиоксидант- ной активностью (а- и у-токоферол, а- и Р-каротин, убихинон и др.), а также стероидные гормоны и другие БАВ.
ЛП представляют собой водорастворимые комплексы, состоящие из липидной — холестерина (ХС), триацилглицерина (ТГ), фосфоли- пидной (ФЛ) и белковой части — аполипопротеида (АПО). Соотношение белок : липид может колебаться в широких пределах. И чем больше размер ЛП, тем больше в ней липидная часть, значит, меньше относительная плотность и меньше подвижность при электрофорезе.
Структура ЛП-комплекса, его липидный состав и обмен во многом определяются природой АПО, который активирует или тормозит соответствующие ферменты.
На основе неодинаковой относительной плотности при центрифугировании в растворах разной плотности или подвижности при электрофорезе в сыворотке крови млекопитающих различают четыре класса ЛП (табл. 23): хил омикроны (ХМ) — самый крупный по величине и самый легкий по относительной плотности класс. При центрифугировании флотирует по поверхности (^ lt; 1,006), второй класс — ЛП очень низкой плотности (ЛПОНП, й = = 1,006—1,019) или пре-В-ЛП. Затем идут ЛП низкой плотности (ЛПНП, й = 1,006—1,063) или р-ЛП и ЛП высокой плотности (ЛПВП, й= 1,063—1,21), или а-ЛП.
При электрофорезе ХМ остаются на старте, подобно у-глобули- нам, ЛПОНП, ЛПНП и ЛПВП занимают положение р, оц- и
23. Состав и свойства липопротеїщов

Класс

Плотность,
г/мл

Диаметр
частицы,
нм

Приблизительная молекулярная масса, х106

Состав, %

ФЛ

тг

ХС

ЭХ

Бе
лок

ХМ

0,95-1,006

200-500

103-104

5-10

80

10

7

2

ЛПОНП

0,99-1,006

20-70

5-100

20

55

13

5

10

ЛПНП

1,006-1,063


2-3

22

И

45

37

21

ЛПВП

1,063-1,21


0,25

26

6

18

15

50


а2-глобулинов соответственно. У птиц в сыворотке крови содержится только три класса ЛП, ХМ у них не обнаружены.
Как видно из таблицы 23, ХМ и ЛПОНП переносят в крови преимущественно ТГ, ЛПОНП - ХС и ЭХ, ЛПВП - ФЛ и ХЭ.
С изменением физиологического состояния организма животных меняется и роль отдельных классов ЛП в обмене липидов. Так, отмечено повышение концентрации ЛПОНП в сыворотке крови высокопродуктивных и жирномолочных коров, а у кур — в период пика яйцекладки.
В лабораторной практике из-за отсутствия доступных методов исследований роль ЛП в обмене веществ оценивают главным образом по сумме р-липопротеидов (ЛПОНП + ЛПНП).
Принцип. В основе метода лежит реакция избирательного осаждения р-липопротеидов декстрина сульфатом или гепарином в присутствии двухвалентных катионов.
Реактивы: 1,025 моль/л раствор МпС12; 1 %-ный раствор гепарина (1 мл должен содержать 1000 МЕ; продажный гепарин, содержащий 25 ООО МЕ в 5 мл, разводят дистиллированной водой 1 : 4).
Оборудование: ФЭК или спектрофотометр; пробирки; штатив для пробирок; стеклянные палочки; пипетки.
Ход определения. 2 мл 0,025 моль/л раствора МпС12 вносят в пробирку и прибавляют 0,2 мл сыворотки крови, перемешивают и определяют оптическую плотность пробы (?’)) на ФЭКе в кювете с толщиной слоя 0,5 см при длине волны 700—720 нм (красный светофильтр) против воды. Затем в кювету добавляют 0,04 мл 1%-ного раствора гепарина. Пробы тщательно перемешивают стеклянной палочкой и строго через 10 мин повторяют фото- метрирование (?2)- Разница ?2 — Е\ приходится на оптическую плотность, обусловленную осадком р-липопротеидами. Умножая ее на коэффициент 1164 (определен расчетным способом), получают количество р-липопротеидов в сыворотке крови в мг%.
Примечание. Кровь берут натощак. Сыворотка сохраняется 2 сут.
Клиническое значение. Основная часть липидов сыворотки крови представлена в виде гидрофильных комплексов а- и р-липопротеидов. На долю р-липопротеидов приходится 60—70 % всех липидов сыворотки крови. Печень является не только местом синтеза, но и активного катаболизма ЛП, а следовательно, и выведения из организма продуктов обмена липидов (холестерина). Поэтому определение их концентрации имеет важное клинико-физиологическое значение.
Повышение концентрации р-липопротеидов в сыворотке крови отмечается при скармливании высокожировых кормов, при острых гепатитах, диабете, ожирении, гипотериозе, желтухах; снижение — чаще всего при длительном дефиците в рационе белка (протеина) или незаменимых липотропных аминокислот, когда нарушается синтез апопротеида.
 
<< | >>
Источник:   И. П. Кондрахин.   Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: Справочник — М.: Колос,. — 520 с.. 2004
Помощь с написанием учебных работ

Еще по теме   Определение содержания Р-липопротеидов в сыворотке (плазме) крови (по Бурштейну в модификации Виноградовой).  :

  1.   Определение каротина в сыворотке (плазме) крови по Карп н Прейсу в модификации Юдкина. 
  2.   Определение магния в сыворотке (плазме) крови по цветной реакции с титановым желтым (по Кункелю, Пирсону, Швейгерту в модификации И. В. Петрухина). 
  3.   Определение содержания неэтерифицированных жирных кислот (НЭЖК) в сыворотке (плазме) крови (по Лауреллу и Тибблингу).  
  4.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИНСУЛИНА В СЫВОРОТКЕ (ПЛАЗМЕ) КРОВИ (DIAGNOSTICSYSTEMLABORATORY, США)  
  5.   Определение свободного аминного азота в сыворотке крови по методу Г. А. Узбекова в модификации 3. С. Чулковой.  
  6.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОРТИЗОЛА В СЫВОРОТКЕ (ПЛАЗМЕ) КРОВИ (DIAGNOSTICSYSTEMLABORATORY, США)  
  7.   Определение билирубина в сыворотке крови животных по методу Ендрассика—Клеггорна—Грофа в модификации В. И. Левченко и В. В. Влизло. 
  8.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРОГЕСТЕРОНА В СЫВОРОТКЕ ИЛИ ПЛАЗМЕ КРОВИ (DIAGNOSTIC AUTOMATION INC., США)  
  9.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЭСТРАДИОЛА В СЫВОРОТКЕ ИЛИ ПЛАЗМЕ КРОВИ (DIAGNOSTIC AUTOMATION INC., США)  
  10.   9.1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТРИЙОДТИРОНИНА (Т3) В СЫВОРОТКЕ ИЛИ ПЛАЗМЕ КРОВИ (DIAGNOSTIC SYSTEM LABORATORY, США)