<<
>>

  Определение соматических клеток в молоке с применением вискозиметра ВМЛК. 

  Принцип. Метод основан на определении скорости вытекания смеси молока с раствором реактива «Мастоприм» через капилляр прибора, зависящей от содержания соматических клеток в молоке: чем их больше, тем медленнее вытекает жидкость.
Реактив: раствор «Мастоприм».
3,5 г препарата вносят в мерную колбу или в мерный цилиндр на 100 мл и доливают дистилли
рованной водой, подогретой до 30—35 °С до метки. Перед применением раствор взбалтывают. Годен в течение 1 сут.
Оборудование: вискозиметр ВМЛК; пипетки на 5 и 10 мл; колбы или цилиндры на 100 мл; весы лабораторные рычажные не менее 3-го класса точности, наибольший предел взвешивания 100 г, поверочная цена деления 0,001 г; термометры технические прямые № 4; стаканы химические на 50 и 500 мл.
Ход определения.Т емпература в лаборатории должна быть 10—30 °С, кислотность исследуемого молока 16—21 °Т. В сосуд вискозиметра вносят 5 мл водного раствора препарата «Мастоприм» массовой концентрации 35 г/л и 10 мл исследуемого молока, тщательно профильтрованного через четыре слоя марли. Нажимают кнопку «Пуск» и перемешивают смесь в течение 30 с. По окончании перемешивания через капилляр вытекает смесь с раствором «Мастоприм». Время вытекания определяют таймером. После анализа смеси сосуд прибора 2—3 раза промывают дистиллированной водой и 4—5 раз продувают с помощью резиновой груши. После очистки сосуда прибор считается подготовленным для исследования последующей пробы молока.
Количество соматических клеток в пробе молока устанавливают по времени вытекания смеси в соответствии с условиями, описанными в таблице 42.
  1. Зависимость количества соматических клеток от скорости вытекания смеси молока с реактивом «Мастоприм»




Время вытекания смеси, с
Количество соматических клеток, тыс/мл
Время вытекания смеси, с
Количество соматических клеток, тыс/мл



За окончательный результат анализа принимают среднее арифметическое двух параллельных определений. При этом разность времени вытекания смеси молока и водного раствора препарата «Мастоприм» через капилляр двух параллельных образцов молока не должна превышать 1—6 с.
Анализатор молока вискозиметрический «Соматос» фирмы
ООО              «Био Тест» (Украина, г. Донецк) предназначен для определения количества соматических клеток в молоке по условной вязкости, измеряемой по времени вытекания контролируемой пробы через капилляр. Принцип работы этого прибора такой же, как и вискозиметра ВМЛК.
Диапазон определения количества соматических клеток в 1 см3 молока на приборе «Соматос» 90—1500 тыс.; относительная пог
решность измерения условной вязкости не более 5 %; продолжительность одного анализа не более 4 мин.
Анализатор молока вискозиметрический «Соматос» Научно-производственного объединения «Петролазер» (Россия, Санкт-Петербург) по работе и техническим характеристикам не отличается от описанного выше анализатора.
Источник'. 71.
Помимо определения общего количества соматических клеток молока (секрета в сухостойный период) возможна их дифференциация.
С этой целью предложен способ приготовления и окраски препаратов из молока и секрета молочных желез для микроскопи- рования клеток, обеспечивающий окрашивание и сохранение структуры клеточных элементов (К. Н. Кондрахина, Г. А. Симо- нян. Авторское свидетельство № 400314). К 15—18 мл свежевыдо- енного молока (секрета) добавляют одну каплю 40%-ного раствора формальдегида и тщательно перемешивают. Затем отбирают 5 мл молока, вносят в центрифужную пробирку, центрифугируют 10 мин при 3000 мин . С поверхности снимают слой жира, выливают над- осадочную жидкость, к осадку добавляют 0,5—1,0 мл сыворотки крови крупного рогатого скота и встряхивают до полного взмучивания осадка. После этого доливают сыворотку до объема З—4 мл и снова центрифугируют в течение 7—8 мин при 3000 мин *. Над- осадочную жидкость сливают, оставшийся осадок тщательно перемешивают путем встряхивания до полного взмучивания. Пипеткой от гемометра Сали набирают полученную взвесь отмытых клеток, наносят каплю ее на чистое обезжиренное предметное стекло и делают мазок. Высушенный мазок фиксируют метанолом в течение
  1. мин и окрашивают краской Романовского, которую готовят перед употреблением на водопроводной воде с pH, близкой к нейтральной (1 капля краски на 1 мл воды). Дифференцируют клетки под микроскопом с окуляром 7 или 10 и объективом 90.

Источник: 36.
Клиническое значение. Подсчет соматических клеток проводят главным образом для выявления маститного молока, а также оценки генетического потенциала продуктивности животных. Содержание соматических клеток у здоровых коров в период выделения нормального молока (285—290 дней) составляет 50—800 тыс/мл. В молоке с примесью молозива или в молоке, полученном в последние 7 дней лактации (стародойное), количество соматических клеток превышает 800 тыс/мл. Сборное молоко высшего сорта содержит не более 400 тыс/мл, молоко высшего сорта — не более 500, первого сорта — до 600 и несортовое — не более 800 тыс/мл соматических клеток.
В сухостойный период количество соматических клеток в секрете здорового вымени увеличивается в десятки и сотни раз. При субклиническом мастите их содержание в молоке колеблется от 0,96 до 16,0 млн/мл; серозном — 1,00—64,0, катаральном — 1,05—23,0, гнойном — 1,50—300 млн/мл (К. Н. Кондрахина).

Большинство ученых считает, что подсчет соматических клеток (в основном лейкоцитов) в молоке — наиболее эффективный и ранний метод выявления скрытых форм мастита.
Определение количества соматических клеток — обязательно, поскольку этот показатель введен в качестве основного при установлении сортности заготавливаемого молока. В молоке выявлена четкая зависимость между увеличением этого показателя и снижением продуктивности. По некоторым данным, при наличии в молоке от 500 тыс. до 1 млн соматических клеток в 1 мл продуктивность коров снижается на 10 %, до 5 млн/мл — на 30 % (ФРГ).
Определение в молоке (молозиве) кетоновых тел, общего кальция, неорганического фосфора, магния, мочевины, витамина А. Перечисленные показатели определяют в обезжиренном молоке (молозиве). [Метод обезжиривания молока (молозива) изложен в начале раздела.]
Определение кетоновых тел в обезжиренном молоке {молозиве) проводят ионометрическим методом (см. Исследование крови).
Повышенную концентрацию кетоновых тел в молоке (молозиве) можно установить с помощью специальных тест-пластин, реактива Лестраде, Ланге й других, в основе которых лежит реакция натрия нитропруссида с ацетоуксусной кислотой и ацетоном в щелочной среде с появлением сиреневой окраски. Тест-полоску или реактив смачивают молоком (молозивом) и через 30—40 с оценивают изменение цвета, его интенсивность. Чем интенсивнее цвет, тем выше концентрация кетоновых тел в исследуемой пробе.
Чувствительность методов с натрия нитропруссидом около 10 мг/100 мл. Такая концентрация ацетоновых тел в молоке (молозиве) бывает при развитии кетоза.
Определение кетоновых тел в молоке (молозиве) проводят по той же методике, что и при обнаружении их в крови и моче.
Определение общего кальция в обезжиренном молоке (молозиве) можно проводить комплексонометрическим методом с индикатором флуорексоном (см. с. 76) или мурексидом (см. с. 79), неорганического фосфора с ванадат-молибденовым реактивом (см. с. 82), с аскорбиновой кислотой (см. с. 84), магния — по цветной реакции с титановым желтым (см. с. 86), мочевины — по цветной реакции с диацетилмонооксимом (см. с. 100).
Витамин А в цельном молоке (молозиве) определяют по методу Бессея в модификации А. А. Анисимовой и В. И. Левченко (см. с. 186).
Клиническое значение. Показатели молока и молозива здоровых коров приведены в приложении 9.
Нами (И. П. Кондрахин) установлено, что содержание кетоновых тел и мочевины в молоке и молозиве коров находится в прямой зависимости от содержания этих веществ в крови. При этом концентрация кетоновых тел и мочевины в крови и молоке идентична. Резкое повышение кетоновых тел в молозиве и молоке (выше 10—12 мг%) отмечается при острой стадии кетоза, которая обычно бывает в первые 100 дней лактации. В последующем, при переходе острой формы кетоза в хроническую, уровень кетоновых тел приближается к верхней границе нормы (8 мг%). При заболевании коров кетозом содержание мочевины в молоке снижается, что связано, очевидно, с уменьшением мочевинообразовательной функции печени. Таким образом, показатели кетоновых тел и мочевины в молозиве и молоке могут служить диагностическими тестами при кетозе. Концентрация мочевины в молоке и молозиве повышается при поступлении в организм больших количеств нитратного азота.
Содержание витамина А в молозиве и молоке также находится в прямой зависимости от концентрации его в крови. Поэтому степень обеспеченности организма витамином А можно оценивать по концентрации его в молозиве и молоке.
Что касается кальция, неорганического фосфора, магния, то содержание их в молозиве и молоке имеет меньшее клиническое значение, предпочтение отдается определению их в сыворотке крови.
  1.  
<< | >>
Источник:   И. П. Кондрахин.   Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: Справочник — М.: Колос,. — 520 с.. 2004

Еще по теме   Определение соматических клеток в молоке с применением вискозиметра ВМЛК. :

  1.   Определение иммунных глобулинов (^) в молозиве (молоке) с натрия сульфитом.  
  2.   Определение нитратов в кормах, крови, молоке и патологическом материале с использованием реактива Грисса.  
  3. 4.2.1. Соматические мутации
  4. Порядок определения показателей экономической эффективности применения удобрений:
  5.   Определение дезоксиниваленола в зерне с применением обращен- но-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии.  
  6. 8.2. МЕХАНИЗМЫ ОНТОГЕНЕЗА 8.2.1. Деление клеток
  7. 8.2.4. Гибель клеток
  8. 8.2.5. Дифференцировка клеток
  9. 8.2.3. Сортировка клеток
  10. 8.2.2. Миграция клеток
  11.   ИССЛЕДОВАНИЕ МОЛОКА (МОЛОЗИВА)
  12. растений, вызывающие порчу молока
  13. АКТИВНОСТЬ АДГЕЗИРОВАННЫХ КЛЕТОК
  14. МОЛОКО, КОТОРОЕ РАСТЕТ НА ДЕРЕВЬЯХ
  15. Именно ради молока проделывали большую работу скотоводы...
  16. «Земляное масло» и «волчье молоко»