<<
>>

  Определение витамина Е в сыворотке крови (см. с. 195). Определение церулоплазмина в сыворотке крови.  

  Принцип. Метод основан на регистрации оптической плотности при 520 нм окрашенных продуктов, образующихся при ферментативном окислении церулоплазмином солянокислого парафенилендиамина.

Реактивы: 0,4 моль/л ацетатный буфер, pH 5,5. 54,4 г натрия ацетата (СНзСООИа • ЗН2О) растворяют в 900 мл дистиллированной воды, доводят pH до 5,5 под контролем рН-метра концентрированной уксусной кислотой и объем доводят водой до 1 л. Хранят в холодильнике несколько месяцев;

1,5%-ный раствор калия роданида;

буферно-субстратная смесь: 10 мг парафенилендиамина гидрохлорида растворяют в 20 мл ацетатного буфера, pH 5,5.

Готовят в день проведения анализов;

10 ммоль/л раствор бензохинона. 10,8 мг бензохинона, высушенного в эксикаторе до постоянной массы, растворяют в 10 мл дистиллированной воды.

Оборудование: спектрофотометр или ФЭК; баня водяная; секундомер; весы аналитические; пробирки химические; пипетки с делениями разные.

Ход определения. В две пробирки вносят по 0,1 мл сыворотки крови, приливают по 1 мл буферно-субстратной смеси и инкубируют в водяной бане при 37 °С в течение 5 мин. Не вынимая пробирок из водяной бани, в одну из них (контрольную) приливают 2 мл охлажденного до 0—4 °С раствора калия роданида. Ровно через 10 мин (по секундомеру) приливают во вторую (опытную) пробирку 2 мл охлажденного раствора калия роданида и обе пробирки вынимают из бани.

Измеряют оптическую плотность опытной пробы против контрольной на спектрофотометре при 530 нм в кюветах с ходом луча 10 мм или на ФЭКе с зеленым фильтром.

Для построения калибровочного графика из свежеприготовленного раствора бензохинона концентрацией 10 ммоль/л готовят разведения стандартных растворов в интервале концентраций от 0,5 до 5,0 ммоль/л. Затем к 0,1 мл каждого стандартного раствора добавляют по 1 мл буферно-субстратной смеси и оставляют при комнатной температуре на 10 мин. После этого в пробы добавляют по 2 мл раствора калия роданида и измеряют оптическую плотность при 530 нм на спектрометре или ФЭКе. В качестве раствора для сравнения используют смесь из 0,1 мл воды, 1 мл ацетатного буфера и 2 мл раствора калия роданида. На бумаге с миллиметровыми делениями строят калибровочную кривую, откладывая по оси абсцисс значения концентраций стандартных растворов, а по оси ординат — соответствующие им значения оптической плотности.

Ферроксидазную активность церулоплазмина рассчитывают по формуле

А = X/t,

где А — активность церулоплазмина, мкмоль/л бензохинона/л ¦ мин; X — количество бензохинона, найденное по калибровочной кривой, ммоль/л; t — разница времени инкубации контрольной и опытной проб, мин (10 мин).

Примечания. 1. Сыворотка крови должна быть без гемолиза.

2. Сыворотку можно хранить в течение 1 нед при температуре 0—4 °С.

Клиническое значение. Церулоплазмин (феррок- сидаза КФ 1.16.3.1) — медьсодержащий белок, который в крови, подобно супероксиддисмутазе (СОД), катализирует реакцию дис- мутации (превращения) свободнорадикальных форм кислорода

(02 ), предохраняя таким образом от их повреждающего действия

липосодержащие биоструктуры. И хотя эффективность церулоплазмина в отношении связывания супероксиданиона оценивают примерно в 100 раз ниже, чем у СОД, в настоящее время он рассматривается в качестве основного антиоксиданта плазмы крови. Как белок церулоплазмин обладает высокой стабильностью к токсическому действию супероксидов даже в условиях интенсивной генерации активных форм кислорода. Церулоплазмин обладает как специфической, так и неспецифической антиоксидантной активностью.

Клинические наблюдения показывают, что содержание церулоплазмина возрастает при хроническом холестатическом гепатите (в

  1. раза) и при первичном билиарном циррозе (в 2 раза), тогда как активность СОД в этих случаях снижается на 23—25 %.

У здоровых животных содержание в крови церулоплазмина колеблется от 150 до 550, в том числе у кур от 50 до 120 мкмоль бензохинона/л • мин.

Источники: 3, 11, 70.

 

<< | >>
Источник:   И. П. Кондрахин.   Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: Справочник — М.: Колос,. — 520 с.. 2004

Еще по теме   Определение витамина Е в сыворотке крови (см. с. 195). Определение церулоплазмина в сыворотке крови.  :

  1.   Определение белковых фракций в сыворотке крови. 
  2.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТЕСТОСТЕРОНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ (DIAGNOSTICAUTOMATIONINC., США)  
  3.   Определение сиаловых кислот в сыворотке крови по реакции с резорцином. 
  4.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИНСУЛИНА В СЫВОРОТКЕ (ПЛАЗМЕ) КРОВИ (DIAGNOSTICSYSTEMLABORATORY, США)  
  5.   Определение общего белка в сыворотке крови рефрактометрическим методом.  
  6.   Определение белковых фракций в сыворотке крови турбидимет- рическим (нефелометрическим) методом.  
  7.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОРТИЗОЛА В СЫВОРОТКЕ (ПЛАЗМЕ) КРОВИ (DIAGNOSTICSYSTEMLABORATORY, США)  
  8.   Определение общего кальция в сыворотке крови комплексоном Арсеназо III.  
  9.   Определение содержания Р-липопротеидов в сыворотке (плазме) крови (по Бурштейну в модификации Виноградовой).  
  10.   Определение мочевины в сыворотке крови по цветной реакции с диацетилмонооксимом.  
  11.   Определение свободного аминного азота в сыворотке крови по методу Г. А. Узбекова в модификации 3. С. Чулковой.  
  12.   Определение каротина в сыворотке (плазме) крови по Карп н Прейсу в модификации Юдкина. 
  13.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТИРЕОТРОПИНА (ТТГ) В СЫВОРОТКЕ КРОВИ (DYAGNOSTIC SYSTEM LABORATORY, США)  
  14.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ КАЛЬЦИТОНИНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ (DIAGNOSTICSYSTEMLABORATORY, США)  
  15.   Определение железа в сыворотке крови по цветной реакции с сульфонированным (3-фенантролином.  
  16.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРОГЕСТЕРОНА В СЫВОРОТКЕ ИЛИ ПЛАЗМЕ КРОВИ (DIAGNOSTIC AUTOMATION INC., США)  
  17.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЭСТРАДИОЛА В СЫВОРОТКЕ ИЛИ ПЛАЗМЕ КРОВИ (DIAGNOSTIC AUTOMATION INC., США)  
  18.   Определение мочевой кислоты в сыворотке крови по реакции с фосфорно-вольфрамовым реактивом.