<<
>>

  Определение йода, связанного с белком (СБЙ), в сыворотке вдо- ви по Акланду в модификации С. В. Силаевой.  

  Принцип. Иод в присутствии церия арсената образует окрашенное соединение, интенсивность которого измеряют на фотоэлектроколориметре.
Реактивы: 10%-ный раствор цинка сульфата. 10 г вещества растворяют в 90 мл дистиллированной воды;
0,5 моль/л раствор натрия гидроксида.
20 г натрия гидроксида вносят в мерную колбу на 1 л и доливают бидистиллированной водой до метки;
  1. моль/л раствор натрия карбоната. 21,2 г натрия карбоната безводного растворяют в мерной колбе на 100 мл и доводят до метки бидистиллированной водой;
  1. моль/л раствор соляной кислоты. Фиксанал соляной кислоты разводят бидистиллированной водой в мерной колбе на 500 мл или берут 82 мл концентрированной соляной кислоты (плотность 1,19) и доводят бидистиллированной водой до 500 мл;

10%-ный раствор серной кислоты. К 94,5 мл дистиллированной воды приливают 5,5 мл концентрированной серной кислоты (плотность 1,84);
раствор мышьяковистого ангидрида. 3,8 г мышьяковистого ангидрида растворяют в 50 мл 1 моль/л раствора натрия гидроксида, добавляют 50 мл бидистиллированной воды и доводят объем до 500 мл 1,75 моль/л раствором серной кислоты. Ядовит. Хранят в темном месте в эксикаторе;
1,75 моль/л раствор серной кислоты. 97,7 мл концентрированной серной кислоты (плотность 1,84) доводят до 1 л бидистиллированной водой;
калибровочный раствор йода. Раствор А готовят из фиксанала калия йода. В 1 мл 0,1 моль/л раствора калия йода содержится 12,68 мг йода. Раствор В: 2 мл раствора А доводят бидистиллированной водой до 1 л. В 1 мл раствора содержится 25,38 мкг йода. Раствор С: 0,4 мл раствора В доводят бидистиллированной водой до 500 мл. В 1 мл содержится 0,202 мкг йода. Раствор О: 10 мл раствора С доводят бидистиллированной водой до 100 мл. В 1 мл содержится 0,02 мкг йода;
раствор церия сульфата. Берут 39 г аммоний-церий-сульфата и растворяют в 1 л 1,75 моль/л раствора серной кислоты;
1 моль/л раствор натрия гидроксида. 40 г натрия гидроксида в мерной колбе доводят бидистиллированной водой до 1 л.
Оборудование: фотоэлектроколориметр; кварцевые пробирки центрифужные; ультратермостат или водяная баня, поддерживающая температуру 37 °С; секундомер; муфельная печь.
Ход определения. В кварцевую центрифужную пробирку вносят 1 мл сыворотки крови, 7 мл бидистиллированной воды, 1 мл 10%-ного раствора цинка сульфата и 1 мл 0,5 моль/л раствора натрия гидроксида. После внесения каждого реактива тщательно перемешивают стеклянной палочкой. Через 30 мин центрифугируют в течение 15 мин при 3000 мин-1. Надосадочную жидкость осторожно сливают. Осадок трижды промывают 10 мл бидистиллированной воды с последующим центрифугированием и удалением жидкости.
К осадку добавляют 1 мл 2 моль/л раствора натрия карбоната, перемешивают стеклянной палочкой. Осадок высушивают в сушильном шкафу при температуре 100 °С в течение 10—12 ч, а затем сжигают в муфельной печи при температуре 400—450 °С. Пробирки охлаждают, к золе добавляют 1 мл 2 моль/л раствора соляной кислоты и 5 мл бидистиллированной воды. Перемешивают стеклянной палочкой тщательно в течение 20—30 мин. Центрифугируют в течение 10 мин при 3000 мин .
В опытную пробирку вносят
  1. мл центрифугата, 1 мл бидистиллированной воды, 0,5 мл раствора мышьяковистого ангидрида и 1 мл 3,5 н. (1,75 моль/л) раствора серной кислоты.

В контрольную пробу вносят 3,5 мл бидистиллированной воды, 0,5 мл 2 моль/л раствора соляной кислоты, 0,5 мл раствора мышьяковистого ангидрида и 1 мл 1,75 моль/л раствора серной кислоты, сливают осторожно, обмывают ею стенки пробирок, перемешивают и ставят в ультратермостат или водяную баню при температуре 37 °С. Вместе с образцами в термостат помещают пробирку с раствором аммоний-церий-сульфата. Через 10 мин в каждую пробирку (не вынимая из термостата) с интервалом в 1 мин (по секундомеру) вносят 0,5 мл раствора аммоний-церий-сульфата и перемешивают. Фотометрируют через 12 мин (точно) на ФЭКе при синем светофильтре или на спектрофотометре при длине волны 434 нм в кювете с толщиной слоя 1 см против контроля, поочередно вынимая пробирки из термостата с интервалом в 1 мин.
Расчет результатов проводят по калибровочному графику. В 4 пробирки (№ 1, 2, 3, 4) вносят по 0,5 мл 2 моль/л раствора соляной кислоты. В пробирку № 1 добавляют 3,5 мл бидистиллированной воды, № 2 — 2,5 мл бидистиллированной воды и 1 мл калибровочного раствора Б (0,02 мкг йода), № 3 — 1,5 мл бидистиллированной воды и 2 мл раствора Б (0,04 мкг йода), № 4 — 0,5 мл бидистиллированной воды и 3 мл раствора О (0,06 мкг йода). Во все пробирки добавляют по 0,5 мл раствора мышьяковистого ангидрида и по 1 мл 1,75 моль/л раствора серной кислоты. Затем все операции выполняют так же, как с образцами.
Калибровочный график строят на полулогарифмической бумаге. Величину экстинкции откладывают в логарифмическом, а количество йода — в миллиметровом масштабах. Найденное по графику количество йода в мкг умножают на коэффициент 200, чтобы получить мкг%.
Примечания. 1. В комнате, где проводят анализы, не должно быть следов йода. 2. Посуда и пробирки должны быть тщательно вымыты. 3. Все реактивы должны быть химически чистыми. 4. Используют только би- дистиллированную воду, полученную с помощью стеклянного (на шлифах) перегонного аппарата.
Источник: 52.
Клиническое значение. Тироксин и трийодтиронин образуются в фолликулярных клетках щитовидной железы из аминокислоты тирозина и неорганического йода. Органический йод плазмы крови представлен в основном гормонами щитовидной железы, связанными с глобулинами и частично с альбуминами. Связанный с белком йод плазмы крови (СБЙ) на 90—95 % состоит из тироксина, поэтому его уровень в крови служит критерием для оценки функционального состояния щитовидной железы. Йод необходим для нормальной жизнедеятельности многих микроорганизмов желудочно-кишечного тракта.
У здоровых взрослых животных содержание СБЙ составляет 5—10 мкг% (394—788 нмоль/л), у телят первого дня жизни — 20,3, на третьи сутки — 12,2 мкг%.
При тиреотоксикозе в сыворотке крови содержится СБЙ выше 10 мкг%, при гипотиреозе — менее 3 мкг%. Снижение уровня СБЙ отмечается при кетозе коров, при недостаточном поступлении йода с кормом и водой, энзоотическом зобе (до 3 мкг% и ниже).
 
<< | >>
Источник:   И. П. Кондрахин.   Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: Справочник — М.: Колос,. — 520 с.. 2004

Еще по теме   Определение йода, связанного с белком (СБЙ), в сыворотке вдо- ви по Акланду в модификации С. В. Силаевой.  :

  1.   Определение каротина в сыворотке (плазме) крови по Карп н Прейсу в модификации Юдкина. 
  2.   Определение билирубина в сыворотке крови животных по методу Ендрассика—Клеггорна—Грофа в модификации В. И. Левченко и В. В. Влизло. 
  3.   Определение свободного аминного азота в сыворотке крови по методу Г. А. Узбекова в модификации 3. С. Чулковой.  
  4.   Определение содержания Р-липопротеидов в сыворотке (плазме) крови (по Бурштейну в модификации Виноградовой).  
  5.   Определение магния в сыворотке (плазме) крови по цветной реакции с титановым желтым (по Кункелю, Пирсону, Швейгерту в модификации И. В. Петрухина). 
  6.   Определение неорганического фосфора в сыворотке крови с ва- надат-молибденовым реактивом (по Пулсу в модификации В. Ф. Коромыслова и Л. А. Кудрявцевой).  
  7.   Определение витамина Е в сыворотке крови (см. с. 195). Определение церулоплазмина в сыворотке крови.  
  8.   Определение меди и железа в крови по Сенделу в модификации С. Г. Кузнецова. 
  9.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТЕСТОСТЕРОНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ (DIAGNOSTICAUTOMATIONINC., США)  
  10.   Определение белковых фракций в сыворотке крови. 
  11.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОРТИЗОЛА В СЫВОРОТКЕ (ПЛАЗМЕ) КРОВИ (DIAGNOSTICSYSTEMLABORATORY, США)  
  12.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИНСУЛИНА В СЫВОРОТКЕ (ПЛАЗМЕ) КРОВИ (DIAGNOSTICSYSTEMLABORATORY, США)  
  13.   Определение сиаловых кислот в сыворотке крови по реакции с резорцином. 
  14.   Определение общего белка в сыворотке крови рефрактометрическим методом.  
  15.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРОГЕСТЕРОНА В СЫВОРОТКЕ ИЛИ ПЛАЗМЕ КРОВИ (DIAGNOSTIC AUTOMATION INC., США)  
  16.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЭСТРАДИОЛА В СЫВОРОТКЕ ИЛИ ПЛАЗМЕ КРОВИ (DIAGNOSTIC AUTOMATION INC., США)  
  17.   Определение белковых фракций в сыворотке крови турбидимет- рическим (нефелометрическим) методом.  
  18.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТИРЕОТРОПИНА (ТТГ) В СЫВОРОТКЕ КРОВИ (DYAGNOSTIC SYSTEM LABORATORY, США)  
  19.   Определение общего кальция в сыворотке крови комплексоном Арсеназо III.