<<
>>

  ОТБОР И ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ КРОВИ К АНАЛИЗУ

 

Взятие образцов крови. Небольшое количество крови для общего анализа берут из сосудов внутренней или наружной поверхности ушной раковины. У собак, кошек, пушных зверей кровь берут из латеральной подкожной вены предплечья или голени, лапки (пальца), кончика хвоста; у кур — из гребня или сережки, вен внутренней поверхности крыла; у уток и гусей — из ступни конечности или большой плюсневой вены.

Когда для анализа необходимо большое количество цельной крови, сыворотки или плазмы, кровь у крупного рогатого скота, лошадей, овец, коз, верблюдов берут из яремной вены, у свиней — из орбитального венозного синуса, у плотоядных — из вен конечностей, у птиц — из вен внутренней поверхности крыла.

У моногастричных животных кровь берут до кормления в утренние часы, у жвачных животных — утром через 4 ч после кормления. Время кормления существенно влияет на содержание в крови липидов, сахара, холестерина и некоторых других показателей. Чрезмерное возбуждение животного во время взятия крови (стресс) влияет на показатели кислотно-щелочного равновесия, сахара, многих гормонов, количество эозинофилов и лимфоцитов. Во многом биохимические показатели крови зависят от фармакологических препаратов, токсических веществ, испорченных кормов. Все эти факторы должны быть учтены при отборе проб крови.

Клинические лабораторные исследования. Исследуют цельную кровь, плазму и сыворотку. Проводят общий гематологический анализ цельной крови, а также определяют содержание в ней сахара, кетоновых тел, меди, цинка, кобальта, марганца, селена и др.

В плазме крови определяют резервную щелочность, содержание натрия, калия, хлора, кальция, магния, мочевины, билирубина, АсАТ и АсАТ, креатинкиназы, витаминов А, С, в сыворотке крови — общий белок и его фракции, мочевину, мочевую кислоту, креатин, свободные аминокислоты, липиды, холестерин, билирубин, кальций, фосфор, ферменты, белково-осадочные пробы и др.

В зависимости от характера исследований готовят одну или две пробирки.

В пробирки для получения цельной крови или плазмы

предварительно вносят одно из противосвертывающих средств (антикоагулянт).

В качестве антикоагулянта используют гепарин (20 ИЕ/мл или 2—3 капли 1%-ного раствора на 10 мл крови); ЭДТА (этилендиа- минтетрауксусная кислота): натрия (На2ЭДТА), калия (К2ЭДТА, К3ЭДТА) — 1,5 мг/мл или 3—4 капли 10%-ного раствора на 10 мл крови; цитрат натрия (ИазСбЬ^Оу) — 1,5—2 мг/мл крови (используют только при исследовании СОЭ); оксалат натрия (Иа2Са02) — 3 мг на 1 мл крови (используют при подсчете количества клеток крови и исследовании их морфологии). Высыхание в пробирке дозированного раствора оксалата должно происходить при температуре не выше 80 °С. Передозировать антикоагулянты нельзя, так как высокая их концентрация вызывает в крови различные изменения, вплоть до гемолиза. Бели кровь берут из сосудов сразу в меланжер (смеситель) или капилляр гемометра Сали, то антикоагулянт не используют.

В пробирки, предназначенные для получения плазмы крови, в которых предусмотрено определение резервной щелочности, кроме антикоагулянта добавляют по 0,5 мл вазелинового масла. Добавление гепарина не благоприятствует определению в крови электролитов, аммиака, натрия оксалата и цитрата — pH, кальция электролитов: ЭДТА-кальция и других, остаточного азота. Пробирки с раствором натрия цитрата или оксалата перед использованием высушивают при температуре не выше 80 °С.

Кровь в пробирки набирают по стенке во избежание гемолиза. В лабораторию ее доставляют в день взятия в термосе. При отправке в лабораторию не допускают замораживания или сильного охлаждения крови, так как это приводит к гемолизу.

В лаборатории кровь в пробирке для отделения сыворотки обводят тонкой спицей из нержавеющей стали и ставят в термостат при температуре 37—38 °С на 1 ч. Между взятием крови и получением сыворотки должно быть не более 5 ч. Отделившуюся сыворотку сливают в центрифужные пробирки и центрифугируют 10 мин, при 3000 мин 1 (об/мин).

Для получения плазмы кровь с антикоагулянтом центрифугируют в том же режиме. Плазма крови отличается от сыворотки содержанием фибриногена. Для лабораторных исследований пригодны сыворотка и плазма без гемолиза крови. Цельную кровь, плазму и сыворотку хранят в холодильнике в плотно закрытых пробирках.

Общий клинический анализ крови, определение в крови сахара проводят в день ее взятия, другие анализы обычно заканчивают в течение 1—3 дней. Для подсчета форменных элементов крови ее берут из капиллярных сосудов.

Кровь с антикоагулянтом хранят в закрытых пробирках в течение

  1. ч при 2—8 °С, при комнатной температуре (15—20 °С) — 8 ч.

Основные требования к подбору материала, выбору антикоагулянта, условиям хранения образца крови и срокам анализа приведены в таблице 3.

3. Материал для исследования, аитикоагулянт, условия хранения образца, сроки анализа

Исследуемый

показатель

(вещество)

Материал для исследования, антикоагулянт

Срок хранения

Гематокрит

ЦК, ЭДТА натрия

48 ч при 4 'С, 6 ч при 23 "С

Гемоглобин

ЦК, ЭДТА натрия, возможны гепарин, оксалат

48 ч при 4 "С, 24 ч при 23 °С

Глюкоза

ЦК, ПК, натрия фторид.

Центрифугат 8 ч при комнат

gt;

Осаждение белков в момент взятия крови

ной температуре, до 3 сут в бытовом холодильнике

Кетоновые те

ЦК, гепарин. Приготовле

Безбелковый фильтрат до

ла

ние безбелкового фильтрата в день взятия крови

3 сут в холодильнике

Резервная щелочность

Минеральные

вещества:

ПК, гепарин, ЭДТА и др.

До 1 сут в холодильнике

фосфор

СК, ПК, гепарин и др. Бы

До 2 сут в холодильнике. При

неоргани

стро отделить плазму, не

хранении содержание фосфора

ческий

допускать гемолиз

возрастает

магний

ПК, гепарин и др.; СК. Не допускать гемолиз

До 5 сут в холодильнике

кальций

СК, ПК свободная от гемолиза

До 3 сут в холодильнике

железо

То же

2—3 сут в холодильнике

Белок общий

СК, свободная от гемолиза; ПК, гепарин и др.

До 3 сут в холодильнике

Белковые

фракции

СК, свободная от гемолиза

До 3 сут в холодильнике

Билирубин

СК, свободная от гемолиза, ПК, гепарин

Исследуют в течение 2 ч. Защищают от солнечного света

Холестерол

(холестерин

общий)

Витамины:

ПК, ЭДТА, гепарин, но не оксалат, цитрат, СК или ПК, свободные от гемолиза

До 5 сут в холодильнике

ретинол,

каротин

СК, свободная от гемолиза

2 нед в замороженном состоянии. Защищают от солнечного света

С

ПК, гепарин и др.; СК без следов гемолиза

3 ч проба стабильна в охлажденной крови. Плазму и сыворотку стабилизируют мета- фосфорной кислотой (6 г/100 мл), ТХУ, или три- хлоруксусной (10 г/100 мл) кислотой. Хранят при 20 "С 21 сут

Исследуемый

показатель

(вещество)

Материал для исследования, антикоагулянт

Срок хранения

Е

Ферменты:

СК, свободная от гемолиза

Несколько дней в холодильнике. Защищают от солнечного света

лактатде

СК или ПК, свободные от

Не охлаждают, исследуют

гідрогена

за

гемолиза, гепарин

в день взятия крови

аспартат-

То же

Не охлаждают, исследуют

ами-

нотранс-

фераза

в день взятия крови

аланин-

»

Не замораживают, исследуют в

ами-

нотранс-

фераза

день взятия крови

холинэсте-

СК или ПК, свободные от

6 ч при комнатной температу

раза

гемолиза, гепарин, ЭДТА

ре, 1 нед при 4 °С, 6 мес при

натрия; цитратную или оксалатную плазму крови исследовать нельзя

минус 70 °С

щелочная

Свежая сыворотка крови,

СК охлаждают немедленно,

фосфотаза

свободная от гемолиза

исследуют быстро. При хранении активность фермента возрастает

Обозначения: ЦК — цельная кровь; ПК — плазма крови; СК — сыворотка крови.

Наборы реактивов. При лабораторных исследованиях используют как отдельные реактивы (ч. д. а., х. ч.), так и их наборы. Для лабораторных анализов выпускают наборы реактивов заводского изготовления, снабженные инструкцией. При использовании их повышается гарантия качества выполняемых лабораторных исследований. При определении содержания гормонов, опухолевых маркеров, использовании автоанализаторов применяют только наборы реактивов заводского изготовления. К ним предъявляют определенные требования, в частности, срок хранения набора при определенных условиях (например, в холодильнике) должен быть не менее 6 мес со дня выпуска. Стабильность рабочих растворов, если возможно, должна сохраняться 1 нед, но не менее чем в течение рабочего дня. Качество реактивов должно быть гарантировано.

Большинство наборов реактивов предназначены для определения одного показателя, но имеются и такие, с помощью которых в биологической жидкости можно устанавливать 2 вещества и более (например, холестерин и мочевую кислоту).

В лабораторной практике широко применяют другие готовые аналитические формы — диагностические полоски, изготовленные на принципах «сухой химии». Они предназначены для качественного, полуколичественного и количественного определения биохимических компонентов в биологических жидкостях. В диагностических полосках все реагенты в твердой фазе нанесены на подложку в необходимом количестве. Нанесенные на подложку химические реагенты вступают в реакцию с исследуемым веществом в растворителе, которым является биологическая жидкость. Фирмы «Лахема» (Чехия»), «Рош Диагностике», «Мерк» (Германия), «Ames» (США) и др. выпускают экспресс-тесты в виде мо- но- и политестов для исследования в моче pH, кетонов, глюкозы, белка, билирубина, уробилиногена, эритроцитов, гемоглобина, нитратов, удельного веса; в крови — мочевины, глюкозы, псевдо- холинэстеразы. Для количественного определения биохимических показателей с использованием системы «сухой химии» разработаны измерительные приборы — специальные фотометры, флюоресцентные спектроскопы и др. Так, фирма «Эймс» (США) выпускает комплект «Серолайзер», позволяющий определять в крови (сыворотке) гемоглобин и некоторые другие показатели. Фирмой «Рош Диагностике» (Швейцария) разработаны отражательные фотометры и диагностические полоски для определения различных показателей крови. Например, система «Рефлотест» позволяет определять в субстратах количество глюкозы, мочевины, билирубина и его фракций, креатинина, белка, триглицеридов, холестерина, альбумина, активность АлАТ, АсАТ, ЛДГ, КК, гамма-ГТ, липазы, щелочной фосфатазы, ионов (фосфора, кальция, аммиака), а также некоторых лекарств (фенобарбитала, теофиллина и др.).

В качестве диагностических полосок применяют многослойные пленки, в которых в качестве подложки используют негнущийся пластик или другой подобный материал. Многослойные пленки, объединенные в слайд, были впервые разработаны фирмой «Кодак» (США). Система «Кодак Эктахем» объединяет слайды и прибор, позволяющие определять в сыворотке крови более 20 биохимических компонентов. Фирма «Optho-Clinical Diagnostics France» (США) выпускает систему «VITROS» для экспресс-диагностики электролитов, ферментов, липидов и иммунодиагностических исследований в моче и сыворотке крови.

Для количественного определения веществ с низкой молекулярной массой (дишстин, фенитоин, фенобарбитал) используют иммуноферментный тест на основе конкуренции.

Недостатками систем «сухой химии» являются высокая стоимость анализа, зависимость выбора метода от производителя, возможность интерференции лекарств.

Источник: 27.

<< | >>
Источник:   И. П. Кондрахин.   Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: Справочник — М.: Колос,. — 520 с.. 2004

Еще по теме   ОТБОР И ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ КРОВИ К АНАЛИЗУ:

  1. Подготовки почвы к игрохимическому анализу
  2.   ПОДГОТОВКА ПОСУДЫ К АНАЛИЗАМ
  3. Определение витаминов, общие свойства, классификация,подготовка растений к анализу
  4.   МЕТОДЫ ОБЩЕГО КЛИНИЧЕСКОГО АНАЛИЗА КРОВИ  
  5. 3.4.5 Обучение «выбору по образцу»
  6. ГЛАВА ВОСЬМАЯ О количестве крови, проходящей через сердце из вен в артерии, и о круговом движении крови
  7. Подготовка семян к посеву
  8. ПОДГОТОВКА ПЧЕЛ К ЗИМОВКЕ
  9. Подготовка кадров высшей квалификации.
  10. ПРЕДПОСЕВНАЯ ПОДГОТОВКА СЕМЯН
  11.   КЛИНИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ МОЧИ  
  12. Подготовка питательных сред
  13. Педагогическая работа и подготовка кадров.
  14. Подготовка почвы
  15.   Определение витамина Е в сыворотке крови (см. с. 195). Определение церулоплазмина в сыворотке крови.