Задать вопрос юристу
 <<
>>

ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ

Вирус ИРТ впервые выделили в культуре клеток Медин, Йорк и Мак-Керчер в 1956 г., Ли и Бейкер - в 1957г (Рис. 87).

Устойчивость. При -60-70°С вирус выживает 7-9 мес, при 56°С инактивируется через 20

мин, при 37°С - через 4-10 сут, при 22°С- через 50 сут.

При 4°С активность вируса снижается через 30-40 сут всего лишь на 1 lg. Лиофилизация почти не влияет на его активность, однако замораживание и оттаивание снижают вирулентность и иммуногенность вируса.

Р-ры формалина 1:500 инактивируют вирус через 24 ч, 1:4000 - через 46, 1:5000 - через 96 ч. Ацетон, эфир, хлороформ и этиловый спирт инактивируют его немедленно. Предполагают, что под воздействием эфира деградирует наружная липосодержащая мембрана вирно- на или экстрагируется вирусная нуклеиновая кислота. В кислой среде вирус быстро теряет активность, длительно (до 9 мес) сохраняется при pH 6-9 и в условиях 4°С. Имеются сообщения о выживании вируса в сперме быков, хранящейся при температуре сухого льда, в течение 4-12 мес, а в жидком азоте - в течение года (6, 8,33).

Показана возможность инактивации вируса в свежей сперме быков при обработке её 0,

3%-ным р-ром трипсина (14). Активность вируса, хранящегося в лиофилизированном состоянии в течение 3 лет, снижалось на 0,5 lg ТЦД 50/мл и составляла 6,5 lg ТЦД5о/мл Хранение вируса при -5°С даже в присутствии сыворотки, через год снижало титр вируса на 0,65- 1,2 lg ТЦД 50/мл (66).

АГ структура. В деталях не изучена. Выделено и охарактеризовано 9 структурных белков вируса ИРТ: VP105, VP90 (гемагглютинин), VP74, VP64, VP54, VP50, VP47, VP40, VP31. Гликопротеины gl, gill, glY участвуют в формировании гуморального и клеточного иммунитета. Наиболее эффективным- в этом отношении является glV (12). По данным PH наибольшей иммуногенностью обладают VP74 и VP90. Белок, маркированный как VP8 с мол.м. 96 кД, является одним из главных белков ГВ-1 КРС. Для идентификации его в вирионах и зараженных клетках использовали ИЭМ. Белок VP8 О-гликозилирован, подобно гомологичному белку VP13/14 ВПГ типа 1. Белок VP8 участвует в модуляции экспрессии генов класса А. У телят он стимулирует пролиферацию Т-клеток и образование АТ как после заражения ВГ-1 КРС, так и после иммунизации очищенным белком (65). За индукцию ВНА ГВ-1 КРС ответственны 4 оболочечные гликопротеина (42, 43). Главными из них являются g70 и g97. Эти гликопротеины содержат основные эпитопы нейтрализации вируса (44). Г A-активность вируса ИРТ КРС Г А-1 КРС связана с мажорным g97, расположенным в шипиках вириона. Г лавные нейтрализующие эпитопы расположены на Г А-домене, что свидетельствует о перспективности использования ГА-антигена для приготовления субъеди- ничной вакцины (42,43).

В структуре glV вируса ИРТ идентифицированы новые 3 нейтрализующие домена. Домен 1 содержит 2 перекрывющихся эпнтопа, домен 2-1 эпитоп. Домен 1 имеет отношение к проникновению вируса в клетки-мишени (45). Очищенный gill полностью блокирует абсорбцию полевого штамма ИРТ (47). Максимальную защиту телят в экспериментальных условиях обеспечивает glV. ВНА к 3 оболочечным гликопротеинам (gl, gill, glV) вируса ИРТ у экспериментально зараженных телят обнаруживались в носовом секрете и смывах с конъюнктивы. Однако АТ не предотвращали размножение вируса в слизистой оболочке носа и глаз, а также не сокращали его экскрецию (48).

АГ вариабельность и родство. В настоящее время известно 5 типов герпесвируса КРС: герпесвирус-1 - возбудитель ИРТ; герпесвирус-2 - возбудитель герпетического маммиллита, генерализованного поражения кожи, стоматита; герпесвирус-3 - является причиной злокачественной катаральной лихорадки; герпесвирус-4 - обнаруживается у здоровых животных, а также у особей с субфибрильной температурой и гнойным дерматитом, при послеродовом мастите и респираторной инфекции (группа Movar, референтные шт. Movar 33/63 и DN599). По размеру негативных колоний шт. ГВ-4 КРС классифицированы на 3 класса :1-й- Movar 33/63, 2-й - LTR Р10; 3-й - V test и DN599. Рестрикционно-эндонуклеазный анализ ДНК - лучший способ дифференциации указанных штаммов); герпесвирус-5 выделен от особей, страдающих лимфосаркомой (синцитийобразующий вирус шт. Пенсильвания 47) (57).

Установлено, что вирусы, выделенные при респираторном (ринотрахеит - 1-й тип) и генитальном (пустулезный вульвовагинит - 2-й тип) синдромах, в АГ отношении идентичны, однако имеют различную электрофоретическую подвижность. Показано АГ отличие новозеландских шт. от американских и австралийских шт. (8, 29, 60). В АГ отношении вирус ИРТ отличается от вирусов простого герпеса, бычьих герпесвирусов типа Allerton, ЗКЛ, БА но проявляет некоторое родство с вирусом РПЛ в РСК и РДП. По данным Deptula W.et.al. (17а), существует 3 типа вируса ИРТ КРС: 1, 2 (подтипы 2а, 2Ь) и 3 (подтипы За и ЗЬ). Установлено существование АГ вариантов герпесвируса 1 КРС, выявляемых в следующих реакциях: 1) перекрестной PH с сыворотками кролика; 2) гель-электрофорезе меченных радиоизотопами вирусиндуцированных полипептидов и гликопротеинов; 3) взаимодействия с наборами монАТ, что выявляется реакцией непрямой ИФ, а также при анализе вирусной ДНК с помощью рестрикционной эндонуклеазы (6, 58, 59). Получены мутанты вируса ИРТ по ТК (49, 50). Такие делеционные мутанты не способны кодировать синтез этого фермента в клетках инфицированного организма. Нарушение этой функции генома сопровождается аттенуацией его при сохранении АГ свойств.

Между тем флюорографический анализ очищенных протеинов показал, что герепесви- рус -1 (ИРТ) содержит 29 протеинов с мол.м. от 11 до 224 кД, а вирус БА - 25 протеинов с мол.м.от 21 до 250 кД. Таким образом, между вирусами ИРТ и БА существует АГ родство (15а). Относительно родства вируса ИРТ и ВПГ (Herpes Simplex) также имеется сообщение (25). Белок 94К родствен главному белку Р8 внешней оболочки Р13/14 ВГП.

В Танзании АТ к вирусу ИРТ КРС обнаруживались животных у других видов: у 76% взрослых буйволов, у 33% телят буйволов, у 24% свиней-бородавочников. Лабораторные животные к экспериментальному заражению вирусом ИРТ невосприимчивы (8).

Локализация вируса. Вирус ИРТ обладает тропизмом к клеткам органов дыхания и размножения. У телят при ИРТ его находят в носовых истечениях уже через день после появления первых признаков болезни и выделяют в течение 14 дн. Наибольшая концентрация его в носовой слизи и содержимом конъюнктивального мешка бывает на 5-6-й дн после заражения (4,5-4,75 lg ТЦД 50/мл). Вирус можно выделить также нз слизи, взятой из трахеи, носовой перегородки, крови, слюны и мочи больного животного. Видимо, существует тропизм вируса ИРТ и к клеткам пищеварительного тракта. В наибольших титрах он обнаружен в прямой кишке больных телят (8).

Вирус ИРТ может мигрировать со слизистых оболочек в ЦНС через аксоны нервных клеток внутри нервных волокон. ЦНС поражается вследствие центростремительного распространения вируса через тройничный нерв и его гассеров узел, а менингомиелит возникает при проникновении вируса по нервным окончаниям, ганглиям и корешкам в спинной мозг. Вирус внедряется в нейроны спинномозговых ганглиев и сохраняется там в период латентной инфекции. Латенция вируса ИРТ порождает ряд проблем, создающих большие трудности в борьбе с этой болезнью. Оказалось, что после заражения КРС вирулентным штаммом все животные становятся латентными носителями вируса точно так же, как и все вакцинные (аттенуированные) штаммы вируса остаются в организме в латентном состоянии. Диссеминация аттенуированных шт. в окружающую среду практически не контролируется. Вакцинация не предотвращает в организме вакцинированных животных латенции вирулентного вируса. Иммунный статус латентно инфицированных животных влияет на характер выделения вируса. Не выяснено, происходит ли рекомбинация аттенуированного и полевого вирусов в организме латентно инфицированного обоими шт. животного (8, 5).

Относительно сроков вирусоносительства серонегативными животными-реконвалесцен- тами данные противоречивы. У некоторых они продолжались 6-12 и даже 19 мес. Эпизо- отологическая роль латентного вирусоносительства при ИРТ не изучена. Описано выделе ние вируса герпеса из культур клеток селезенки плода КРС после длительного культивирования его in vitro (30-67 дн). Вирус ИРТ выделен из тканевых эксплантатов тройничного нерва клинически здоровых коров (20). Переболевшие животные могут быть серонегативными, но выделять вирус со спермой (5, 8). Доказано постоянное выделение вируса от латентно инфицированных телят после введения им синтетических кортикостероидов. В этом случае вирус выделялся из тканей верхних дыхательных путей и реже - из культур клеток других органов. От животных, не получавших кортикостероиды, вирус выделить не удавалось (5, 8). Показано, что кортикостероиды могут реактивировать персистирующий вирус даже через 5 лет после первичного заражения. У таких животных уровень АТ, как правило, остается прежним или же несколько увеличивается; клинически такая провокация сопровождается поражением эпителия респираторного тракта и слизистой оболочки носоглотки.

При обследовании быков-производителей в 1992-1994 гг. в племхозяйствах Сибири с использованием гибридизационной тест-системы, содержащей нерадиоактивный (биотини лированный) ДНК-зонд, показана высокая степень латентной инфекции и эффективность тест-системы для её выявления (69).

Высказано предположение, что сенсорные ганглии являются местом латентной перси- стенции вируса и что реактивация его в иммуносупрессированном организме (с помощью дексаметазона) может привести к распространению вируса от ганглиев через нервные клетки к слизистым оболочкам, при этом он оказывается недоступным воздействию гуморальных АТ. У животных, привитых живой вакциной после провокации кортикостероидом, также могут появиться клинические признаки болезни. Вирус у быков-производителей может выделяться после переболевания до 6 мес, и они могут заражать коров при случке. Вирусоносительство не связано с присутствием АТ, однако с появлением их вирус из влагалищных выделений выделить не удавалось (8).

Влияние вируса на плод. Плод КРС очень чувствителен к вирусу ИРГ. Заражение его возможно как во второй половине утробного развития, так и в конце первого периода эмбриогенеза. Виремия в госпитальном периоде наблюдается в течение короткого времени и бывает слабо выражена. Аборты у животных, заболевших во время беременности, как правило, являются следствием гибели плода. Самый высокий титр вируса обнаруживают в котиледонах, даже когда в самом плоде вируса уже нет. В плаценте также обычно содержится много вируса, даже когда нет ее видимых поражений. Изолировать вирус из плаценты впервые удается через 8 дн после заражения беременного животного. Аборт может наступить не ранее чем через 3 мес после прививки живой вакциной (8,10).

Экспериментальная инфекция. Телят чаще заражают культуральным вирусом, причем в зависимости от метода введения и возраста животных болезнь протекает различно. При интратрахеальном, интраназальном, алиментарном и интравенозном методах заражения болезнь протекает в виде ринотрахеита с конъюнктивитом. Для интраназального введения достаточно 1 мл культуральной жидкости с активностью вируса 105 ТЦД 5о/мл. При интратрахеальном введении вирус вначале размножается в легких и лишь на 5-й день появляется в носовом секрете. Выделить его удается уже через 3 дня из пораженных тканей трахеи и гортани. У интраназально зараженных животных находят гипертрофию эпителия с ней- трофильной инфильтрацией. Основным показателем изменений является потеря ресничек эпителия трахеи. Это способствует быстрому распространению инфекции, так как разрушается основная линия неспецифической защиты (8, 10). При вульвовагините и конъюнктивите вирус выделяют из экссудата или носовых истечений. При внутривенном, алиментарном или контактном заражении вирус в наибольшей концентрации обнаруживают в паренхиматозных органах, пищеводе, желудке, крови и мышцах на 7-й день после заболевания телят. Вовлечение в патологический процесс тройничного ганглия является результатом центростремительного распространения вируса ИРТ вдоль периферического нерва из слизистой оболочки носа. При введении вируса в половые органы появляется локальная (вульвовагинальная) инфекция, которую обычно диагностируют как инфекционный пустулезный вульвовагинит. Она характеризуется покраснением, припуханием, болезненностью слизистой оболочки половых органов. У некоторых животных к 72 ч образовывались пустулы, а затем развивались эрозии и появлялись гнойные выделения.

У нетелей, зараженных в вымя, развивался некроз эпителиальных клеток альвеол и молочных протоков, который сопровождался инфильтрацией полиморфнонуклеарных клеток. Экспериментально зараженные телята выздоравливали и, как правило, освобождались от вируса через 22-60 дн после заражения. В сыворотке их крови через 2-3 нед можно обнаружить ВНА в максимальном титре (1:8 - 1:32) (8).

Экспериментально вирусом ИРТ заражаются и козы. Свиней, лошадей, морских свинок, мышей, новорожденных мышат и КЭ заразить не удавалось. На кроликах удается воспроизвести латентную инфекцию ИРТ. С этой целью кроликов заражали в конъюнктивальный мешок одного глаза. Вирус выделялся из конъюнктивы в течение 9-14 дн. Кролики получали 4-дн курс дексаметазона на 2, 3 и 6-й мес после заражения. У всех через 72 ч удавалось реизолировать вирус, который выделялся в течение 5-7 дн. Возвратная инфекция сопровождалась конъюнктивитом (6, 8).

Иногда полевые шт. вируса ИРТ, выделенные от телят с клинической картиной менин- гоэнцефалита, при интраназальном введении здоровым телятам вызывали заболевание с такой же клинической картиной: вирус проникал по верхне- и нижнечелюстным ветвям тройничного нерва. Установлено обострение ИРТ после заражения телят вирусом ПГ-3 (6,10).

АГ активность. Гликопротеины gl, gill и glV являются основными АГ вируса ИРТ, связанными с нейтрализацией вируса; gl и glV экспрессируются как р-белки, тогда как гликопротеин gill - как у-белок. Поэтому гликопротеины gl и glV наиболее предпочтительны при создании вакцины против ИРТ, чем gill (27).

При раздельной иммунизации телят очищенными гликопротеинами вируса ИРТ - gl и glV максимально иммуногенными оказался гликопротеин glV, а также безвирусный лизат инфицированных клеток. Предполагается, что гликопепгид мол.м. 71,5 кД является АГ, индуцирующим синтез АТ, участвующих в цитотоксичности, а полипептид VP8 (мол.м. 73 кД) индуцирует синтез ВНА (17а).

При естественном и экспериментальном заражениях вирус индуцирует образование ВНА, КСА и ПА. В сыворотке крови переболевших или иммунных животных присутствуют АТ, которые выявляются РНГА. Нет корреляции между титром АТ и сроками выделения вируса от больных животных. Показано, что 19S - раннем 7S - поздние АТ быстрее нейтрализуют гомологичные, чем гетерологичные штаммы. ВНА могут быть комплементзависи- мые и комплементнезависимые. В ответ на первичную естественную инфекцию происходит накопление первых АТ, титр их быстро снижается и через 6 мес приближается к титру ком- плементнезависимых АТ. Эти различия можно использовать в ретроспективной диагностике для суждения о давности переболевания животного (8).

В индукции сывороточных ВНА при ИРТ участвуют 4 гликопротеина мол.м. 69-75, 77- 81, 82-92 и 108-115 кД. Поскольку в организме КРС могут персистировать как полевые, так и аттенуированные (вакцинные) штаммы, метод селективного разрушения АГ при различных инактивирующих воздействиях (p-пропиолактон, формалин, Уф лучи) открывает возможность антиген специфического серологического тестирования вакцинированных и естественно инфицированных животных (5, 8).

Установлен переход специфических молозивных АТ против ИРТ у новорожденных телят в секреты дыхательных путей уже в 1 дн после потребления молозива. Титры АТ в секретах носовой полости в большинстве случаев не превышали 1:8 (в молозиве, сыворотке матерей и сыворотке телят они достигали 1:128 - 1:256) и их устанавливали лишь до 15-20 сут. после рождения. В носовых секретах lg М оказывает защитное действие при экспериментальном инфицировании.

Культивирование. Вирус ИРТ легко культивируется в монослое клеток почки телят или в эмбрионах коров. При низких титрах вируса его ЦПД в культуре клеток наступает через 48-96 ч. Это действие легко нейтрализуется специфической сывороткой. Для культивирования пригодны перевиваемые линии клеток почек и тестикулов телят. Изменения в них развиваются позднее - на 4-6-е сут. Репродукция вируса сопровождается подавлением митотической активности клеток и образованием внутриядерных включений. Сначала появляется большое число включений, которые, сливаясь между собой, образуют одно крупное включение с выраженным светлым ободком. Оно занимает почти все пространство ядра. Хроматин сохраняется в виде узкого ободка, непосредственно прилегающего к ядерной оболочке, целостность которой, как правило, не нарушается. Вместе с включениями выявляются небольшие симпласты. Клетки пикнотизируются, округляются и отторгаются от стекла (11).

Вирус, выращенный в монослое клеток МДВК, обладает стабильной активностью 6,75- 7,25 lg ТЦД50 (4а, 5). Клетки МДВК эффективно синхронизируются лавастадином - лекарством для лечения гиперхолистеринемии у людей (67). Помимо первичных и перевиваемых культур клеток используют органные культуры слизистых оболочек верхних дыхательных путей, ротовой полости, ЖКТ, конъюнктивы, влагалища телят и эмбрионы коров. В культурах из органов вирус обнаруживали через 29 дн после заражения. ЦПД развивалось фокус- но, сначала по периферии эксплантатов. В органных культурах слизистой оболочки носа и трахеи телят, убитых на 2-й и 7-й дн после заражения, вирус находили в течение 1-2 мес. В культуре клеток под агаровым покрытием на 4-6-й дн инкубации вирус ИРТ образует округлые, с ровными краями бляшки, диаметром 1-2 мм (8). В изменчивости вируса ИРТ следует иметь в виду, что некоторые мутанты (например, gill) с делецией гена гликопротеина могут реплицироваться в культуре клеток, но они функционально дефектны (26).

Выход вируса ИРТ в системе с микроносителем был в 10 раз выше, чем в стационарной клеточной культуре и составлял 8,33-8,5 lg ЦПД50/МЛ. Цитопатическое действие вируса полностью завершалось через 3 дн после инфицирования и его можно было непосредственно наблюдать в культуре с микроносителем. Суспензионную культуру клеток МДВК на микроносителе Gelaspher М используют для крупномасштабного получения вируса ИРТ (40).

ГА свойства. ГА свойства вируса ИРТ связаны с мажерным гликопротеином g97, расположенном в шипиках вирионов. Главные нейтрализующие эпитопы расположены на ГА домене, что свидетельствует о перспективности использования ГА-антигена для изготовления субъединичной вакцины (35, 42, 43). Все штаммы ИРТ, выделенные в США, Канаде, Великобритании, Дании и Малайзии, проявляют Г A-активность в отношении мышиных эритроцитов. Герпесвирус-1 кошек также агглютинирует мышиные эритроциты, ГА-домены у бычьего герпесвируса (ИРТ) и герпесвируса-1 кошек, не идентичны. ГА вируса ИРТ является структурным протеином вириона и располагаются на вирусных шипиках. Герпесвирус- 1 кошек обладает мажорным (110 кД ) и двумя минорными (73 и 67 кД ), гликопротеинами, отличающимися от гликопротеинов вируса ИРТ. У всех штаммов вируса ИРТ очень важный эпитоп нейтрализации высокой специфичности располагается на ГА. РГА позволяет выявлять вирус ИРТ в материале, концентрация вируса в котором не ниже 107 ТЦД50/мл(5а).

<< | >>
Источник: Сюрин В.Н., Самуйленко А.Я., Соловьёв Б.В., Фомина Н.В.. Вирусные болезни животных. - Москва, ВНИТИБП, 928 с, ил.. 2001 {original}

Еще по теме ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ:

  1. ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
  2. ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
  3. ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
  4. ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ.
  5. ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
  6. ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
  7. ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
  8. ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
  9. ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
  10. ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
  11. ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
  12. ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
  13. ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
  14. ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
  15. ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
  16. ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ.
  17. ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ