<<
>>

ИНФЕКЦИОННАЯ АНЕМИЯ ЛОШАДЕЙ

Anemia infectiosa eqvorum (лат.); Eqvine infectious anemia (англ.);

Infectiose Anemie der Einhufer, Anstekcende Blutarmut der Pferde (нем.);

Anemia infectiuse du cheval (франц.)

Инфекционная анемия лошадей (ИНАН, болотная лихорадка) - вирусная болезнь однокопытных, характеризующаяся поражением кроветворных органов и в целом мезенхимы, преимущественно хроническим течением, рецидивирующей лихорадкой (в периоды обострения) и анемий.

До начала XX в ИНАН регистрировалась во многих странах Европы, а также в США, Японии, Индии в виде эпизоотических вспышек. Наиболее широкое распространение она получила в период мировой войны, сопровождаясь высокой смертностью (до 80%). В последнее время по данным МЭБ ИНАН встречается в США, Австралии, Японии, Индии, в странах Северной и Южной Африки, Европы (Болгария, Венгрия, Чехословакия, Россия, Украина, Белоруссия, ФРГ, Франция и др.).

Клиническая картина и патологоанатомические изменения. Болезнь развивается после периода инкубации в течение от 15 дн до нескольких недель в природных условиях и от 10 до 20 дн в эксперименте. Различают сверхострое, или септицемическое, острое, подо- строе и хроническое или латентное течение анемии. В развитии болезни характерна определенная цикличность с чередованием периодов обострения (рецидивов) и затухания (ремиссий), что создает в конечном счете большое многообразие ее форм.

При сверхостром течении отмечают быстрый подъем температуры тела, геморрагический гастроэнтерит, асфиксию, сердечную слабость, атаксию, параличи задних конечностей и гибель животных через несколько часов или 1-2 дня.

Острое течение болезни также характеризуется лихорадкой (41-42°С), угнетением или легким возбуждением, гиперемией и отеком конъюнктивы и слизистой оболочки носовой и ротовой полостей, нарушением сердечной деятельности, иногда кровавым поносом, исхуданием при сохраненном аппетите, набуханием и бледностью с наличием кровоизлияний оболочек третьего века, отеками в области живота, препуция, конечностей, шаткостью походки, одышкой, быстрым развитием анемии.

Кровь становится водянистой (разжижение), количество эритроцитов падает до 1 млн в 1 см3. В крови появляются комплексы “инфекционный вирус - антитело” и отложение их в клубочках почек (35, 36). Количество гемоглобина снижается до 20-30%, СОЭ ускорена (70-80 делений в первые 15 мин), отмечается гипергам- маглобулинемия и тромбоцитопения. В церебральной жидкости регистрируют увеличение количества белка и белых клеток крови (37). Продолжительность болезни 1-3 нед, иногда месяц, и животные погибают (1).

Подострое течение болезни длится 2-3 мес, сопровождается ремиссирующей лихорадкой и такими же симптомами в период рецидива, что и при остром течении. В период ремиссии указанные признаки постепенно исчезают, и животные выглядят здоровыми. Чем чаще и продолжительнее приступы лихорадки, тем быстрее истощаются защитные силы организма, и животные в конце концов погибают.

Хроническое течение болезни чаще является продолжением подострого течения. Оно отличается чередованием лихорадочных периодов (через 1-3 дн) и продолжительными периодами покоя (ремиссии) - до нескольких месяцев. Во время рецидивов наблюдаются те же симптомы, что и при остром течении болезни: утомляемость, одышка, сердцебиение, потливость, тремор мышц, исхудание. В период ремиссий они постепенно исчезают.

Латентное течение ИНАН наблюдается обычно в стационарно неблагополучных пунктах у резистентных лошадей. Для него характерны резкие и кратковременные подъемы тем пературы. Такие животные внешне кажутся здоровыми, но являются вирусоносителями и представляют большую опасность для окружающего поголовья, служат источником возбудителя инфекции. Болезнь может длиться годами, проявляясь иногда лишь заметным исхуданием, быстрым утомлением и учащенным сердцебиением на работе и при быстрой езде. Персистенция вируса в организме таких внешне здоровых животных может наблюдаться на протяжении 18 лет (3).

Патологические изменения варьируют в зависимости от тяжести и продолжительности течения болезни. Отмечают выраженный геморрагический диатез в виде многочисленных кровоизлияний на слизистых, серозных оболочках и в паренхиме органов, увеличение селезенки и лимфоузлов, дистрофические изменения в паренхиматозных органах.

Картина вскрытия после острого течения болезни характеризуется септическими явлениями. Наблюдают (непостоянно) исхудание животного, желтушные оттенки слизистых оболочек глаз, носа, рта, с точечными кровоизлияниями, наиболее часто на третьем веке и слизистых губ. Подкожная и межмышечная клетчатка желтушна, пронизана кровоизлияниями, местами имеет студневидные серозно-геморрагические инфильтраты. Лимфоузлы, особенно портальные и почечные, набухшие, сочны, покрасневшие; окружающая их ткань отечна. Скелетные мышцы крестца и крупа кое-где серого или глинистого цвета, на разрезе рисунок сглажен. Селезенка сильно увеличена (спленомегалия), кровенаполнена, с кровоизлияниями под капсулой, пульпа дряблая. Печень увеличена, дрябловата, мозаичного цвета. Почки увеличены, бледны, усеяны кровоизлияниями, граница слоев стушевана. Сердце увеличено, миокард серого или серо-глинистого цвета. В ЖКТ геморрагическое воспаление слизистой оболочки с кровотечением в полость. В легких кровоизлияния под плерву и в паренхиму. Кровь водянистая, светло-красного (алого) цвета. В головном и спинном мозге иногда находят полнокровие, кровоизлияния, отек и дряблость мозгового вещества (1).

Патологоанатомические изменения после хронического течения болезни характеризуются отсутствием выраженных септических явлений, истощением, бледностью и желтушно- стью слизистых оболочек, наличием мелких кровоизлияний на серозных покровах кишечника, сердца и в подкожной клетчатке, студневидных отеков клетчатки конечностей, подгрудка и брюшных стенок, увеличением селезенки и лимфоузлов, их плотной консистенцией. Печень увеличена, плотная, имеет мускатный рисунок на разрезе. Почки увеличены, плотны, серо-желтоватого цвета. Миокард в состоянии зернистой и жировой дистрофии с очагами склероза (серо-белые участки).

После латентного течения болезни в трупах не обнаруживают характерных изменений. Иногда отмечают изменение цвета селезенки (пульпа её приобретает светло-красное окрашивание), следы старых кровоизлияний (пигментные пятна) на эндокарде, под серозными оболочками и очаговые некрозы миокарда.

Гистологические изменения. Наиболее характерны и постоянны изменения со стороны мезенхимы в виде пролиферации клеток мононуклеарно-макрофагальной системы и нарушения обмена железа (гемосидерина). При остром течении болезни уже через 11-12 дн после заражения в селезенке отмечают сильное инфильтрирование ткани незрельми эритроцитами, уменьшение количества гемосидерина и хаотичное его расположение по всей пульпе (Рис. 141), а не в присинусных зонах (как это бывает в норме), атрофию лимфофолликулов, набухание и пролиферацию ретикулярных клеток, увеличение числа лимфобластов, эозинофильных гранулоцитов (48).

В печени устанавливают набухание купферовских клеток, увеличение в просветах капилляров числа свободных макрофагов, насыщенных гемосидерином, гиперемию и кровоизлияния, отек стромы, расширение и заполнение желчных капилляров, зернистую и жировую дистрофию гепатоцитов. В почках регистрируют застойную гиперемию, дистрофию и некроз канальцевого эпителия, серозный отек и слабую лимфоидно-гистиоцитарную ин фильтрацию межканальцевой ткани (12). В сердце выявляют полнокровие сосудов, кровоизлияния, серозный отек межмышечной соединительной ткани, зернистую, реже жировую дистрофию мышечных клеток. В лимфоузлах наблюдают серозно-геморрагическое воспаление, умеренную гиперплазию лимфоидных и гистиоцитарных клеток. Аналогичные имму- нопролиферативные изменения отмечают в тимусе. Изменения в легких выражаются резкой гиперемией, серозно-геморрагическим отеком, кровоизлияниями в паренхиму, пролиферацией гистиоцитов в межальвеолярных перегородках и отложением в альвеолярных макрофагах гемосидерина. В костном мозге - отек, увеличение количества эритробластов и мие- лобластов, миелоцитов, клеток мононуклеарно-фагоцитарной системы, монобластов и клеток плазмоклеточной серии (плазмоцитов, плазмобластов) (49). В головном мозге - негнойный менингоэнцефалит, набухание, хроматолиз, вакуольная дистрофия нейронов (21). При хроническом течении инфекции в селезенке преобладает пролиферация клеток ретикулоэн- дотелия, сопровождающаяся накоплением большого количества лимфоидных клеток и гистиоцитов, почти полное отсутствие гемосидерина (видны лишь мелкие зерна в единичных макрофагах), увеличение лимфофолликулов. В печени на первый план выступает пролиферация клеток ретикулоэндотелия, очагово-диффузные скопления лимфоидных и гистоцитар- ных клеток, гемосидероз, зернистая и жировая дистрофия и некроз гепатоцитов, появление в клетках зерен липофусцина (23). В период обострения болезни наблюдают тяжелые нгкро- дилрофичзжиг изменения печеночных клеток центральной и периферических зон долек. В период ремиссии отмечают слабую лимфоидную инфильтрацию, почти полное отсутствие гис- тиоцитарной реакции, небольшие отложения внутриклеточного гемосидерина. В почках находят гломерулонефрит, склероз сосудистых клубочков и отложение гемосидерина в эндотелии клубочков и клетках пролиферата. В сердце - очаговый миокардит, развитие склероза на месте погибших мышечных клеток. В лимфоузлах - диффузную лимфоидную гиперплазию и небольшое количество гемосидерина, много митозов в зародышевых центрах лимфофолликулов. В легких превалирует инфильтрация лимфоидными клетками альвеолярной и междольковой ткани с отложением гемосидерина в макрофагах и альвеолярном эпителии. В костном мозге - угнетение эритропоэза, гиперплазия миелоцитов и нейтрофилов (1, 5,10).

Патогенез. Патогенез изучен недостаточно (1). Вирус, проникая в организм восприимчивого животного парентерально с кровью, широко распространяется по органам и тканям. Чаще всего он выявляется в селезенке, лимфоузлах и печени. Методом ФА АГ вируса четко определяется в цитоплазме макрофагов в виде зерен или гранул. Возбудитель размножается в эритроцитах крови и кроветворных клетках костного мозга, сильно наводняя органы и ткани больного животного, достигая в крови в период лихорадки концентрации 10 5,5-10 6,5 ТЦД50/мл (31). В это время он легко выявляется различными методами. В то же время в период ремиссии вирус можно обнаружить лишь путем заражения здоровой лошади. Наиболее характерный признак болезни - анемия - сопровождается резким уменьшением количества эритроцитов, гемоглобина, разжижением крови, ухудшением её свертываемости. Согласно современным представлениям, анемия может быть обусловлена двумя механизмами. Первый механизм связан с непосредственным действием вируса на кроветворный орган - костный мозг, вызывая угнетение его деятельности, нарушение эритропоэза, лизис эритроцитов, снижение (или прекращение) усвоения железа. Второй механизм, который считают главным в формировании анемии, связан с образованием противовирусных АТ (30,33).

Показано, что 3-я фракция комплемента (СЗ) и АТ, синтезирующиеся в организме в ответ на проникновение вируса, покрывают зараженные эритроциты лошади, из-за чего последние становятся хрупкими, быстро и в большом количестве разрушаются и фагоцитируются макрофагами. Вирус вызывает раздражение клеток ретикулоэндотелия, вследствие чего происходит интенсивная пролиферация и накопление клеток мононуклеарно- макрофагальной системы в селезенке, печени, почках и других органах. Селезенка утрачивает способность перерабатывать погибшие эритроциты, и эту функцию берут на себя другие органы, в клетках которых откладывается большое количество гемосидерина. Исследование пунктатов костного мозга показывает, что основной симптом болезни - анемия - возникает вследствие угнетения эритропоэза, а также лизиса эритроцитов, подвергшихся воздействию вируса и фагоцитированных клетками РЭС. При остром течении болезни эрит- робластическая группа клеток уменьшается с 40 до 4,6%, а гистиоцитарная группа, клетки которой, обладая фагоцитарной функцией, пожирают эритроциты, увеличивается с 31 до 40%. Считают, что в развитии анемии играет роль снижение деятельности костного мозга. Период полужизни эритроцитов, меченых 51Сг , у здоровых лошадей равнялся 15,5+2,08 дн, а у больных - 8,98+1,2 дн. Различия между средними значениями 2 групп было статистически достоверно (Р<0,01). Компенсаторный гипергемолиз отмечен у лошадей с хроническим течением болезни.

Раздражение вирусом нервных рецепторов, а также влияние гуморальных факторов, вызывают включение механизмов защиты организма, сильное раздражение всей РЭС, в макрофагах (гистиоцитах) которой образуется большое количество гемосидерина. Последний обнаруживается не только в селезенке, но и в печени, почках и реже - в других органах. По мере развития болезни количество гистиоцитов снижается, что свидетельствует об истощении этой функции РЭС, в то время как в пролиферативной реакции начинает преобладать размножение лимфоидных клеток, особенно в селезенке, лимфоузлах, которые, не проявляя свойств микрофагоцитоза и не образуя, следовательно, гемосидерина, обладают, вероятно, антисептической функцией. При хроническом течении болезни РЭС печени, не будучи в состоянии заменить выпавшую функцию селезенки по переработке отмирающих эритроцитов, также истощается. В ней размножаются лимфоидные клетки, развиваются сосудистые и дистрофические изменения с омертвением паренхимы в центре долек, а гемоглобин, освободившийся при распаде эритроцитов, выводится из организма. Для инфекционной анемии характерен также негнойный менингоэнцефалит. При хронической анемии описаны эндокардиты, гломерулонефриты, и клеточно-узелковая реакция со стороны интимы сосудов, которая рассматривается в настоящее время как проявление аллергии.

Анемия - характерный симптом ИНАН, обусловленный гемолизом вне и внутри сосудов, вызванным иммунологическим механизмом. Эритроциты зараженных лошадей покрыты противовирусными АТ. После заражения животного происходит быстрое повышение титра вируса практически во всех тканях. Затем он снижается, однако с рецидивами болезни вновь синхронно повышается. Такая периодическая репродукция вируса ведет к высвобождению пирогеиов, АГ и других субстанций, способствующих развитию симптомов болезни. Все описанные при ИНАН поражения, по-видимому, являются иммунологически опосредованными, и тяжесть их проявления находится в прямой связи с периодическими приступами репродукции вируса. Наблюдаемые при ИНАН воспаления клубочков почек обусловлены отложением комплекса вирус-АТ (9). По мнению Henson и McCuire (22), анемия, гломеру- лоиефрит, гепатит, гипергаммаглобулинемия, лимфаденопатия и др. патологические процессы являются иммунологически опосредованными и обусловлены уровнем размножения вируса. Поэтому у лошадей с частыми обострениями почти всегда развиваются тяжелые некро-дистрофические и воспалительные изменения. Иммунологически опосредованный механизм патогенеза болезни убедительно показан в опытах с использованием иммунодепрессантов. Обработка экспериментально зараженных лошадей циклофосфамидом предотвращает развитие характерных поражений (22).

ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ

Вирусную природу ИНАН лошадей впервые установили Карре и Валле в 1904-1906 гг.

Морфология и химический состав. Вирус имеет внешний оболочечный гликопротеин gp90 и трансмембранный гликопротеин gp45. В настоящее время консервативные эпитопы белков gp90 и gp45 служат основной целью поисков компонентов вакцины против ИНАН. Гликопротеин gp90 детерминирует с геном env.

Вирус ИНАН имеет конический капсид длиной около 120 нм и шириной 60 и 20 нм соответственно на широком и узком конце (41а). В его структуре обнаружено 6 основных белков с мол.м. от 9 до 90 кД (см табл.Х1.4.) и 4 минорных полипептида. В состав наружного слоя оболочки вирионов входит 2 гликопротеина - gp90 и gp45 (26), не связанные между собой дисульфидными связями (27). Определена полная последовательность нуклеотидов в геномной РНК вируса ИНАН, имеющей длину 8200 нуклеотидов. У него, как и у ВИЧ, важную роль в регуляции экспрессии играет ген tat; мРНК tat состоит из 3-х экзонов: первые 2 генома - трансактиваторы tat, а 3-й, вероятно, кодирует белок rev (41а). У изолята МА-1, характеризующегося отсутствием вирулентности, определена последовательность нуклеотидов в 3'-концевой половине геномной РНК вируса. По сравнению с изолятом Войминг в составе области z3 у изолята МА-1 имеется последовательность длиной в 66 нуклеотидов (от нуклеотида 91-го до нуклеотида 25-го). В этой области локализован мощный усилитель транскрипции. Предполагается, что авирулентность МА-1 связана с этими изменениями в последовательности области z3 длинного концевого повтора в геномной РНК (13).

Устойчивость. Вирус устойчив к действию трипсина (25), РНК- и ДНК-азы, чувствителен к эфиру; термолабилен, при 60°С теряет вирулентность за 30 мин. Кипячение разрушает его через 1-2 мин, солнечные лучи инактивируют за 1-3 ч. При 0°С до -2° С сохраняется до 3-

х лет, в глицерине - 7 мес, в моче и навозной жиже - до 2,5 мес, в высушенной крови в комнатных условиях - 7 мес, в стерильной воде - до 160 дн. Инфицированное сено и пастбища безопасны через 9 мес после заражения. В осенне-зимний период в овсе вирус теряет патогенные свойства только через 8,5 мес. Устойчив к высушиванию и гниению. В лиофи- лизированном состоянии при комнатной температуре сохраняет вирулентность в течение 7 мес. Замораживание на его активность не влияет. При биотермической обработке навоза вирус инактивируется через 30 дн, 2-4%-ный р-р NaOH убивает его за 20 мин, 35%-ный р-р креалина - через 30 мин, 20%-ная хлорно-известковая смесь, содержащая 29,5% активного хлора, обезвреживает вирус в сточных водах за 3 сут. Вирус относительно устойчив к воздействию химических средств. Глицерин частично инактивирует его в течение 4 нед и полностью - за 7 мес, 2%-ный р-р формалина инактивирует вирус за 5 мин, но через 5 мин можно реактивировать его р-ром аммиака (8).

Антигенная структура. У вируса ИНАН описаны 3 группы АГ: р29, р12 и р14. АГ р29 представляет собой белок, обозначенный как G-АГ. Он находится внутри вириона, освобождается при обработке вируса эфиром, является общим для всех штаммов вируса ИНАН и обнаруживается в РСК, РДП и РИФ. Помимо общего специфического G-АГ, вирус содержит поверхностные АГ р12ир14, различающиеся в опытах перекрестного заражения гомологичными и гетерологичными штаммами (23,31).

Таблица XI.4 Основные структурные белки вируса ИНАН (6) Обозначение и молекулярная масса белка, кД Количество молекул в ви- рионе Локализация gp90 300 Оболочка вирионов gp45 300 Там же р26 6000 Сердцевина р15 7600 « pli 2000 « р9 3300 «

Кроме 2-х негликолизированных вирусных пептидов (р29 и р12), вирионы ИНАН содержат гликопротеины gp77/79 (основной гликопротеин вириона) и gplO. АГ вирусной оболочки gp77/79 ответственен за продукцию ВНА и подвержен АГ-изменчивости под влиянием АТ. Установлено, что наиболее АГ- активная область белка gp45 (оболочечного гликопротеина) располагается на аминном конце и лежит между гидрофобными доменами слияния и трансмембранным доменом (16).

В состав сердцевины вирионов входит 4 негликолизированных белка (р26, р15, pi 1, р9), однако основная масса состоит из белков р26 и р15. Четыре минорных полипептида (р70, р61, рЗО, р23) присутствуют в вирионах в незначительных количествах (около 1%), природа и локализация их не выявлены. Известно, что штаммы возбудителя ИНАН различаются в PH и перекрестной защиты на лошадях. Установлено, что в процессе инфекции происходят изменения поверхностных АГ вируса, что сопровождается появлением антигенных вариантов, т.е. большое разнообразие вариантов вируса ИНАН может генерироваться в организме инфицированных животных (38). Установлено быстрое появление новых АГ вариантов вируса в процессе персистентной инфекции. Существенная изменчивость генов поверхностных гликопротеинов gp20 и gp45 в процессе инфекции у одного и того же животного выявляется с помощью монАТ.

Антигенная вариабельность и родство. Штаммы вируса ИНАН, выделенные в различных частях земного шара, в АГ-отношении идентичны. Они различаются в PH, но имеют общий АГ, выявляемый в РСК, РЗСК и РДП. Помимо того, вирус ИНАН дает перекрестные серологические реакции с вирусом ВИЧ (СПИД), но не дает таких перекрестов со всеми другими ретровирусами животных. У лошадей, экспериментально зараженных клонированным вирусом ИНАН, развивается хронически протекающая болезнь с периодическими рецидивами лихорадки, сопровождающаяся виремией. Изоляты вируса, выделенные во времч приступов лихорадки, были неодинаковы по АГ-свойствам и отличались друг от друга в PH и ЭФ-ПААГ, но не в РСК и РДП. Существенная изменчивость генов поверхностных гликопротеинов gp90 и gp45 вируса ИНАН обнаружена в процессе инфекции одного животного. Изоляты, вводимые с интервалом в 2 нед, АГ различались между собой (24); белки сердцевины при этом не изменялись (38). Причины АГ-вариабельности вируса - точечные мутации в гене env и иммуносупрессии (30а), а не только за счет влияния ВНА, как считалось раньше (14). Изменения в гене env в процессе персистирующей инфекции приводят к изменению АГ-свойств белков вируса ИНАН и его вариабельности (27). Мутантный вирус ИНАН, утративший способность к нейтрализации, выделен после 13 пассажей в культуре в присутствии АТ к типо- и группоспецифическим детерминантам gp90. АГ-дрейф вируса был связан с потерей 2-х эпитопов на gp90 (41). Селекция вариантов этого вируса в организме животного происходит не за счет влияния ВНА, как считалось ранее. Выделенные от экспериментально зараженных лошадей 2 штамма вируса ИНАН во время 2-х лихорадочных циклов имели различия в нуклеотидной последовательности и эти различия устанавливались при исследовании мембран культур клеток периферических лейкоцитов в ИФ.

Локализация вируса. Вирус проникает в организм восприимчивых животных, главным образом, парентерально и разносится по всем органам и тканям. Особенно интенсивно размножается в костном мозге и крови, вызывая угнетение эритропоэза и гемолиз части эритроцитов во время приступа лихорадки. Наиболее высокие титры вируса наблюдают у зараженных лошадей во время первого подъема температуры. Затем титр вируса снижается, но в период повышения температуры вновь возрастает. У лошадей без симптомов болезни титр вируса низкий, иногда его даже невозможно выявить (в культуре лейкоцитов). ИНАН - лимфопролиферативная болезнь с непрерывной виремией при наличии АТ. Эго можно объяснить повреждением лимфоцитов, вызванным вирусом, в результате чего защитный клеточный иммунный процесс нарушается. Возбудитель в крови находится в виде комплекса вирус-АТ. У большинства лошадей наблюдают гипергаммаглобулинемию и снижение в сыворотке крови количества комплемента С-3. При изучении локализации вирусного АГ с помощью ИФ у экспериментально зараженных лошадей установлено следующее. Через 6-38 дн после заражения животных АГ обнаруживали в цитоплазме клеток селезенки, лимфоузлов, печени, почек, легких, костного мозга, зобной железы, головного мозга, мозжечка, гипофиза и желудка. Он обычно находился в единичных клетках или в макрофагах в виде небольших капелек, включенных в цитоплазму.

Вирусовыделение. Из организма больной лошади вирус выделяется с мочой, калом, носовой слизью, секретом конъюнктивы, молоком. Загрязненные выделениями больных корма, навоз и другие субстраты могут быть факторами передачи инфекции.

Антигенная активность. У инфицированных лошадей образуются АТ к гликопротеинам оболочки и мажорному протеину сердцевины (р26) вирионов. Однако гликопротеины оболочки вирионов очень вариабельны, что является одним из основных механизмов защиты возбудителя от элиминирующего воздействия факторов иммунитета. В организме инфицированных лошадей в процессе персистенции возбудителя образуется большое количество различающихся по гликопротеину антигенных вариантов вируса. КСА у больных животных впервые обнаружены в 1966 г. Сыворотка экспериментально зараженных лошадей становится положительной в РСК с 14-го по 29-й день после инокуляции и удерживается в таком значении в течение нескольких недель. Величину КС-титра у больных животных можно разделить на 4 стадии: предшествующую - перед развитием АТ, раннюю - увеличение титра с высоким плато, снижающую - с уменьшением титра, и позднюю. Комплементфиксирую- щие ингибиторы находятся в период поздней стадии болезни не только у IgG, но и у других lg. Специфические ПА появляются в крови лошадей в течение 45 дн после заражения. Основные симптомы болезни, включая анемию, тромбоцитоиемию и гломерулит, являются следствием развития специфического иммунного ответа (15). ПА к группоспецифическому АГ выявляют РИД, используя АГ из зараженных культур клеток или тканей селезенки или нз очищенного вируса. ПА обнаруживают на 14-38-й день после заражения; они могут сохраняться до 7 лет. Преципитины более постоянно обнаруживают в сыворотках крови хронически больных животных. В селезенке больных лошадей выявлен АГ, участвующий в реакции преципитации с АТ сыворотки крови больных животных. Сыворотка крови зараженных лошадей содержит антивирусные АТ, реагирующие как в РСК, так и в РЗСК. Выделенный IgG реагировал в РСК, в то время как иммуноглобулин IgG(T) ингибировал РСК и связывался в РЗСК. В РЗСК АТ выявляли с 28-го по 120-й день после заражения животного.

АГ детерминанты для индукции ВНА расположены в вариабельной области gp90 (39). Основная гуморальная реакция направлена против высоко АГ домена, представленного 83 аминокислотами. Низкие титры ВНА и высокий уровень антигликопротеинной активности сывороток свидетельствует о том, что иммунный ответ направлен прежде всего не на нейтрализующие эпитопы, а на вирусные гликопротеины. Большинство иммуногенных сайтов на поверхности вириона не чувствительно к нейтрализации. Нейтрализующей активностью обладает фракция IgG, которую обнаруживают через 40 дн после заражения животного. У некоторых лошадей она сохраняется в течение всей болезни и действует на поверхностные АГ вириона, т.е. реагирует с типо-, но не группоспецифическим компонентом вируса ИНАН. Опыты показали, что 99% инфекционного вируса циркулирует в сыворотке больных животных в комплексе с АТ. С помощью метода прямой ИФ изучены локализация и места репликации вируса in vivo в организме экспериментально зараженных лошадей. Получены белки tat вируса ИНАН, обладающие полной биологической активностью (51).

Экспериментальная инфекция. Подкожное или внутривенное введение 20-50 мл, а часто даже 0,01 мл крови или сыворотки, вызывает у лошадей, в частности у жеребят, через 9-93 дня остро или хронически протекающую болезнь или только вирусоносительство. Заражение per os удается с трудом даже при введении массивных доз вируса. Требуется повторная дача большого количества инфицированных крови или мочи. Возможность заражения через неповрежденную кожу оспаривается. Ослов и мулов заразить искусственно удается не всегда. Удавалось заражать свиней, в их организме вирус находился 30-197 дн.

Культивирование. Вирус может развиваться в переживающей ткани селезенки, надпочечников и лимфоузлов жеребят, в культурах эмбриональных тканей лошади, но без признаков ЦПД, в культуре клеток лошадиных лейкоцитов (29), а также клеточной линии кожи лошади (34). В присутствии 50% сыворотки культуральная жидкость через 3-4 дн после инфицирования содержала вирус, который можно было осадить в течение 1 ч при 100000 g. В культуре лейкоцитов лошади после заражения вирусом (шт. Wyoming) изменения обнаруживали на 12-15-й день. После ряда пассажей ЦПД проявлялись на 4-9-й день. При ЦПИ в культурах в большинстве случаев выявлялся вирусный АГ в РСК с сыворотками больных лошадей. ЦПИ и КС-активность специфичны. Шт. Wyoming размножается в перевиваемой линии клеток кожи лошади. Культуральная жидкость в этой системе пригодна для получения растворимого вирусного АГ, пригодного для диагностики. Следует иметь в виду, что культивирование вируса ИНАН in vitro сопряжено с существенными трудностями. Вирус размножается в лейкоцитах лошадей, но при длительном пассировании резко возрастает опасность контаминации его герпесвирусом лошадей. Латентный период после заражения культуры лейкоцитов лошади продолжается 18-24 ч, титр вируса достигает наивысшего показателя через 48-72 ч после заражения. Пока еще нет удовлетворительного метода титрования данного вируса, его титруют на пони. Показано размножение вируса в клетках комара. Вирусный АГ в цитоплазме зараженных клеток обнаруживают с помощью ИФ через 18- 24 ч после инокуляции, а через 72 ч число клеток, содержащих цитоплазменный АГ, достигает 75%. Заражение культуры лейкоцитов устанавливают по ЦПЭ, появлению группоспецифического КС-АГ и ИФ. Адаптированный к культуре клеток вирус ИНАН обычно имеет титр 106-107 ТЦД 50/мл. Серийное пассирование его в культуре клеток ведет к аттенуации вируса в отношении лошади. Для серийного пассирования вируса ИНАН успешно применяют культуру лейкоцитов осла. По мере пассирования повышалась вирулентность вируса для культуры и возрастал титр. Одновременно снижалась его патогенность для лошадей и ослов. После 100 последовательных пассажей вирус утратил способность вызывать заболевание у этих животных и не реверсировал при пассировании на лошадях и ослах. Аттенуированный штамм защищал лошадей (79%) и ослов (100%) от вирулентного вируса. Иммунитет формировался медленно (до 6 мес). Кроме культуры лейкоцитов лошади и осла, вирус ИНАН (шт. Р337) адаптирован к культуре почечных клеток лошади (линия V-26). Адаптированный к перевиваемой линии клеток вирус ИНАН размножался в субкультурах кожно-мышечной ткани эмбриона лошади. Вирус ИНАН вызывает хроническую инфекцию культуры клеток собак (CF2Th) и кошек (FEA). При пассировании его в этих культурах клеток обнаружен высокий уровень активности обратной транскриптазы, которая в 6-20 раз выше в присутствии Mg2+, чем Мп2+ (8).

ГА свойства. Вирус обладает Г А активностью в отношении эритроцитов морской свинки. Г А АГ вируса типоспецифичны и отличаются от АГ, выявляемых в PH. ГА не отделим от вирусных частиц. Рецепторы эритроцитов разрушаются протеолитическими ферментами и формальдегидом, но устойчивы к нейраминидазе, дезоксихолату натрия и перйодату калия. В сыворотке больных лошадей содержатся анти-ГА. В РТГА вирус каждого штамма ингибируется только гомологичной антисывороткой. Появление в сыворотках крови анти- ГА предшествует появлению у них ВНА. Вирус ИНАН адсорбируется на лошадиных эритроцитах, гемолиз их происходит после инкубации со свежей сывороткой крови лошади или морских свинок при 37°С. Эритроциты, обработанные 4 ед. ГА и неразведениой свежей сывороткой лошади, лизируются на 20%, в то время как при обработке 4 ед. комплемента морской свинки - на 100%. Специфическая сыворотка лошади подавляет способность вируса агглютинировать эритроциты, но гемолиз не тормозит. Добавление специфической сыворотки к вирусу, уже прикрепившемуся на эритроцитах, усиливает гемолиз.

Гемадсорбирующие свойства. Наблюдали адсорбцию эритроцитов морской свинки на инфицированной вирусом культуре клеток кожно-мышечной ткани эмбриона лошади.

<< | >>
Источник: Сюрин В.Н., Самуйленко А.Я., Соловьёв Б.В., Фомина Н.В.. Вирусные болезни животных. - Москва, ВНИТИБП, 928 с, ил.. 2001

Еще по теме ИНФЕКЦИОННАЯ АНЕМИЯ ЛОШАДЕЙ:

  1. ИНФЕКЦИОННАЯ АНЕМИЯ ЛОШАДЕЙ
  2. Инфекционная анемия лошадей
  3. Инфекционный энцефаломиелит лошадей
  4. Алиментарная анемия.
  5.    Алиментарная анемия молодняка
  6. АЛИМЕНТАРНАЯ (ЖЕЛЕЗОДЕФИЦИТНАЯ) АНЕМИЯ ПОРОСЯТ - ANEMIA ALIMENTARIA
  7. АНЕМИЯ ГОЛОВНОГО МОЗГА И ЕГО ОБОЛОЧЕК - ANEMIA CEREBRA ЕТ MENINGUM
  8. БОЛЕЗНИ СИСТЕМЫ КРОВИ Анемия (АпЬаепиа)
  9. ГЕМОЛИТИЧЕСКАЯ АНЕМИЯ - ANAEMIA HAEMOLITICA
  10. Происхождение лошади. Породы лошадей
  11.    Часть 3    Инфекционные болезни
  12. КЛАССИФИКАЦИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ
  13. ИНФЕКЦИОННЫМ БРОНХИТ
  14. ИНФЕКЦИОННЫЙ ГЕПАТИТ СОБАК