<<
>>

Глава II МЕТОДИКА

  Древесина представляет собой стойкий лигноцеллюлозный комплекс, для#расщепления которого необходимо присутствие специфической, вооруженной сильными ферментами флоры микроорганизмов. В результате жизнедеятельности этой флоры в среде должны появиться, с одной стороны, более простые соединения, легко доступные вульгарным микроорганизмам, а с другой — возникают продукты синтеза, требующие для дальнейшего расщепления специфических агентов.

Поэтому при разработке методики исследования перед нами стояла задача таким образом подобрать питательные среды и способы посева, чтобы по возможности создать благоприятные условия для различных физиологических групп микроорганизмов, специфических для данного субстрата.
В качестве основного исходного материала мы применили питательные среды из самой древесины и её компонентов: целлюлозы и лигнина, а также продуктов распада древесины в разных стадиях разложения. Вместе с тем был использован и ряд общепринятых в микробиологической практике сред — для выявления различных физиологических групп бактерий.
Поскольку древесина в конечном итоге превращается в составную часть почвы, были приняты во внимание физиологические группы микроорганизмов, характерные для почвенной микрофлоры.
В основном, кроме древесины и ее дериватов, применялись среды двух типов:элективные — для специфических групп бактерий, преимущественно синтетические по составу, и среды из естественных субстратов, каковы сусло и мясо-пептонный агар и бульон.
Преимущество синтетических сред в том, что они дают возможность выделять микроорганизмы, строго приспособленные к определенным источникам питания, недостаток их—отсутствие в них целого ряда веществ биологического происхождения, как-то: ферментов, витаминов и т. д., что ограничивает рост некоторых видов. Для ряда гетеротрофных микроорганизмов наиболее благоприятны питательные среды из сложных органических субстратов, как мясо,сусло и т. п. Эти среды богаты белками, углеводами в легко доступной форме, содержат витамины и другие необходимые для роста микроорганизмов вещества.
Мы пользовались для посева тремя различными типами сред: из изучаемого субстрата (древесина и её дериваты), элективными и из естественных природных материалов (мясной агар, сусло- агар).
Засев материала производился двумя способами: эмульсией и кусочками. Последний способ позволяет выявить микроорганизмы, рост

которых при посеве эмульсией заглушается быстро растущими формами. Этот метод, как элективный, применяется при выделении миксо- бактерий, целлюлозо-разрушающих бактерий, * азотобактера, Вас. mycoides.
Чтобы получить посевной материал в виде кусочков, образцы древесины раскалывали вдоль и из внутренней части стерильно вырезали небольшие частички, которыми и пользовались для посева. Из рыхлой древесины кусочки легко отщеплялись с помощью пинцета.
Посев эмульсией производился в тех случаях, когда образцы древесины могли быть растерты в ступке в порошок.
Исходная эмульсия готовилась на дистиллированной воде и содержала от 1 до 5 г сухого вещества ( в зависимости от удельного веса материала) в 100 см3 стерильной воды. В последующем исходную эмульсию разводили в убывающем порядке в отношении 1:10. Засевались первое, второе, третье и четвертое разведения.
Среды из древесины и ее дериватов
Для приготовления этих сред применялась: древесина свежевыпавшего дерева, древесина в стадии бурой гнили (из колод, зараженных Fomes pinicola Ске.), древесина в стадии красной гнили.
Материал растирали в ступке или пропускали через ручную мельницу. Полученный порошок взбалтывали в дистиллированной воде или в растворе питательных солей и уплотняли агар-агаром (количество древесных опилок или порошка из бурой и красной гнили составляло 1«/о).
Состав стандартных растворов, применявшихся для этой цели, следующий:
Раствор № 1, pH = 4,5 — 5,0
Калий фосфорнокислый однозамещенный . . .              1,0 г
Магний сернокислый              0,5 „
Амоний сернокислый              1,5 „
Железо сернокислое              •              следы
Марганец сернокислый              следы
Воды дистиллированной              1000 ем?
Раствор № 2, pH = 7,0 — 7,2
Калий фосфорнокислый двухзамещенный ...              1,0 г
Магний сернокислый              0,5 „
Калий азотнокислый              4,0 и
Натрий хлористый              0,5 „
Железо сернокислое              следы
Марганец сернокислый              следы
Воды дистиллированной              1000 сМ3
Рвствор № 3, pH = 6,0
Калий фосфорнокислый однозамещенный ...              1,0 г
Магний сернокислый              0,5 „
Пептон              2,5 *
Железо сернокислое              следы
Марганец сернокислый              следы
Воды дистиллированной              1000 слг Зак. 1280



Рецепты показывают, что применявшиеся растворы отличались как по концентрации водородных ионов, так и по характеру источников азота.
Всего были подготовлены три типа растворов:              №1 — источник
азота в форме (NH4)sS04 (среда физиологически кислая), № 2 — источник азота в форме KNO3 (среда физиологически щелочная), № 3 — азот в форме пептона. Эти же растворы в дальнейшем применялись для приготовления среды с фильтровальной бумагой, целлюлозой и лигнином.
Среды из древесины и ее дериватов, приготовленные на воде и на солевых растворах и уплотненные агар-агаром, засевали эмульсией и кусочками и выдерживали при комнатной температуре довольно длительное время (до 1 месяца)., так как рост на них был замедленный по сравнению с суслом.
<< | >>
Источник: В. я. ЧАСТУХИН, М. А. НИКОЛАЕВСКАЯ. БИОЛОГИЯ ПОЧВ Исследования по распаду растительных остатковв хвойных лесах. 1948

Еще по теме Глава II МЕТОДИКА:

  1. Методика гальванизации.
  2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА
  3. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА
  4. Методика проведения процедур
  5. Методика обработки траекторий.
  6. МЕТОДИКА ОЦЕНКИ ВЛИЯНИЯ ГИДРОМЕЛИОРАЦИИНА СУХОДОЛЬНЫЕ НАСАЖДЕНИЯ
  7. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ ПОЛОВЫХ ОРГАНОВ
  8. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ ПОЛОВЫХ ОРГАНОВ
  9. Методика отлова и содержания молодняка сайгаков
  10. 6.7. Основы методики изучения структуры популяций