<<
>>

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ПОЧВ

  Биологическую активность почв определяют с помощью микробиологических и биохимических методов. К микробиологическим методам относятся аппликационные и методы определения численности микроорганизмов разных систематических и физиологических групп.
К биохимическим относятся методы определения дыхания и ферментативной активности почвы.
Описаны методы определения в почве активности ферментов оксидоредуктаз и гидролаз («Методы почвенной микробиологии и биохимии». М., 1980). Наиболее простыми по выполнению являются методы определения активности дегидрогеназ и инвертазы.
Для определения активности дегидрогеназ в почве в качестве акцептора водорода применяют бесцветные соли тетразолия (2,3,5-три- фенилтетразолий хлористый, ТТХ), которые восстанавливаются в красные соединения формазанов (трифенилформазан, ТФФ). Навеску воздушно-сухой почвы 1 г помещают в 50-миллилитровую вакуумную колбу с притертыми стеклянными пробками, добавляют 10 мг углекислого кальция и тщательно смешивают. Затем добавляют 1 мл 1%-ного раствора ТТХ. Определение проводят в анаэробных условиях, для этого воздух из колбы эвакуируют при разряжении 10—12 мм рт. ст. в течение 2—3 мин. Колбы осторожно встряхивают и ставят в термостат при 38° на 24 ч. Контролем служит стерилизованная почва (180° в течение 3 ч) и субстраты без почвы.
После окончания инкубации в колбы добавляют по 25 мл этилового спирта и встряхивают в течение 5 мин. Содержимое колбы фильтруют и полученный раствор ТФФ колориметрируют на фотоэлектроколориметре, используя кюветы шириной 5 мм и синий светофильтр с длиной волны 500—600 нм. Количество формазана в мг рассчитывают по стандартной кривой. Для составления калибровочной кривой готовят стандартный раствор формазана в этиловом спирте (0,1 мг в 1 мл), затем в мерные колбы на 25 мл берут соответствующее количество стандартного раствора, содержащее от 0,1 до 1,0 мг формазана, этанолом доводят до метки и фотоколориметрируют согласно вышеописанному способу. Активность дегидрогеназ выражают в мг ТФФ на 10 г почвы за сутки. Ошибка определения — до 8%.
Фотоколориметрический метод определения активности инвертазы заключается в следующем. В колбу емкостью 50 мл помещают 5 г почвы, добавляют 10 мл 5%-ного раствора сахарозы, 10 мл ацетатного буфера (pH 4,7) и 5—6 капель толуола. Колбы закрывают пробками, встряхивают и помещают в термостат при температуре 30° на 24 ч, периодически встряхивая их. Контроль — стерилизованная почва (3 ч при 180°) и чистый субстрат.
После инкубации содержимое колб фильтруют в 100-миллилитро- вые мерные колбы. Из фильтра берут 6 мл в большие пробирки, добавляют 3 мл сегнетовой соли и 3 мл раствора сернокислой меди, хорошо перемешивают и кипятят на водяной бане в течение 10 мин. Затем пробирки с раствором охлаждают в холодной воде, содержимое переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют в течение 5— 7 мин при 3000 об/мин. Прозрачный центрифугат колориметрируют на фотоэлектроколориметре (светофильтр — 630 нм), кюветы шириной 1 см. Количество глюкозы рассчитывают по предварительно составленным калибровочным кривым. Исходный стандартный раствор — 6 мг глюкозы в 1 мл. Активность инвертазы выражают в мг глюкозы на 1 г почвы за сутки.
Ошибка определения — до 5%.
Один из новых методов — метод инициированного сообщества почвенных организмов. С помощью сканирующего электронного микроскопа в сочетании с классическими методами микробиологии изучают структуру и особенности инициированного субстратом сообщества Яоч- венных микроскопических обитателей, отмечают доминирование и соотношение отдельных групп бактерий, актиномицетов, грибов, водорослей, простейших и микроскопических беспозвоночных животных.
Метод заключается в следующем. Исследуемую почву в воздушно-сухом состоянии растирают в ступке, предварительно удалив крупные корешки, просеивают через сито 1 мм, увлажняют дистиллированной водой до 60% от полной влагоемкости и тщательно перемешивают. Пастообразную массу почвы вносят в маленькие чашкц Петри до краев и слегка уплотняют шпателем так, чтобы образовалась ровная поверхность. На тонкий слой крахмала осторожно накладывают два чистых листа бумаги так, чтобы расстояние между ними было 1 см; чашку с почвой переворачивают и прикладывают на 1 с к образовавшейся полоске. Лишнее количество крахмала сдувают сжатым воздухом так, чтобы на почве осталась тонкая полоска не более двух-трех* слоев крахмальных зерен. Чашки с почвой помещают в другие чашки большего




Рис. в2. Грибы амилолитического сообщества почв
Сверху вниз: Penicillium, Mucor, Coniothirium, Chaetomium
Слева — конидиеноспы и спорангии, справа — конидии и спорангио-
споры. (Фото в СЭМ В. С. Гузева)

Рис. 83. Почвенные диатомовые водоросли Pennatae и Centricae (четыре верхних снимка) и раковинные корненожки Centropyxis, Euglypha и Corytion в сканирующем электронном микроскопе. (Фото В. С. Гу-
зева)



Рис. 84. Почвенные беспозвоночные животные и микроорганизмы амилолитического сообщества почв.
4 верхних снимка — нематоды отряда Tylenchidae и актиномнцеты на их поверхности (стрелка на левом снимке указывает место, увеличенное на ппавом снимке); 4 нижних — клещ Acaridae и его п'па, справа — бактерии на поверхности (см. стрелки) (Фото В. С. Гулева).


диаметра, на дно которых налита дистиллированная вода для поддержания постоянной влажности. В таком состоянии чашки с почвой инкубируют при 25° в термостате в течение 2—3 нед. За развитием организмов на полоске крахмала наблюдают визуально, с помощью лупы, светооптического и сканирующего электронного микроскопов. В сканирующем микроскопе можно наблюдать развитие грибов (рис. 82), водорослей и простейших (рис. 83), беспозвоночных животных (рис. 84). 
<< | >>
Источник: И. П. БАБЬЕВА, Г. М. ЗЕНОВА. Биология почв. 1983

Еще по теме МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ПОЧВ:

  1. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ БИОЦЕНОЗОВ И БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ПОЧВ
  2. Биологическая активность почв
  3. Микробиологическая диагностика и биологическая активность почв
  4. Поступление растительных остатков и биологическая активность почв
  5. Изучение биологически активных соединений — ферментов и антибиотиков. Создание новых методов
  6. Методы профилактики развития резистентности паразитов к препаратам Биологические методы.
  7.   Определение активности а-амилазы в сыворотке крови, моче, дуоденальном содержимом амилоклассическим методом со стойким крахмальным субстратом (метод Каравея).  
  8. ИНВЕРТАЗНАЯ АКТИВНОСТЬ ТОРФЯНЫХ ПОЧВ БОЛОТА «ТАГАН» Е. Ю. Старикова, Е. В. Порохина, О. А. Голубина
  9. ОСНОВНЫЕ ПРИНЦИПЫ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ИНДИКАЦИИИ ДИАГНОСТИКИ ПОЧВ
  10. Исследования по эрозии почв
  11. БИОЛОГИЧЕСКАЯ ИНДИКАЦИЯЗАГРЯЗНЕНИИ ПОЧВЕННОЙ СРЕДЫИ САМООЧИЩЕНИЕ ПОЧВ
  12. РАСТИТЕЛЬНЫЕ СИСТЕМЫ IN VITRO ДЛЯ ТЕСТИРОВАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТОВ ИЗ ТОРФА О.              А. Рожанская
  13. Биологическая индикация загрязнения почвенной среды и самоочищения почв
  14. Методы изучения шмелей на фуражировочном участке: полевые методы исследования экологии и этологии шмелей
  15. МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ ГЕОХИМИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ЖИВОТНЫХ