<<
>>

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИТАМИНОВ В ПОЧВЕ-С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДРОЖЖЕЙ КАК ИНДИКАТОРОВ

Культуры дрожжей могут быть использованы в качестве индикаторных при определении витаминов группы В, потому что среди этих организмов найдены штаммы, реагирующие на присутствие только одного определенного витамина. Микробиологические методы определения витаминов группы «В» с помощью культур дрожжей мы приводим в качестве примера использования почвенных микроорганизмов как биологических индикаторов.

Индикаторные культуры ограничены в своих потребностях в отношении других веществ и хорошо развиваются в простой синтетической среде.

Схема опыта по обнаружению витаминов группы «В» в почве с помошью дрожжевых индикаторных культур заключается в следующем В каждую из шести стерильных чашек Петри закапывают по одной капле минусовых (без одного витамина) смесей витаминов и суспензии дрожжевых культур, индикаторных на определяемые витамины. Чашки заливают расплавленной и охлажденной до 40° стерильной глюкозо-минеральной средой Ридер и тщательно перемешивают агар быстрым вращением чашки для равномерного распределения' дрожжевой суспензии. На поверхность застывшей среды накладывают четыре-пять дисков из стерильной фильтровальной бумаги, пропитанной: 1) почвенной суспензией (1—2 диска); 2) стандартным раствором определяемого витамина; 3) автолизатом дрожжей или раствором смеси всех витаминов; 4) дистиллированной водой.

Водную вытяжку из почвы готовят следующим образом. К 10 г сухой почвы (без корней) добавляют 90 мл дистиллированной воды в колбе Эрленмейера на 150 мл и выдерживают на кипящей водяной бане в течение 1 ч при постоянном взбалтывании. Уровень жидкости, отмеченный вначале, доводят до метки стерильной дистиллированной водой. После декантации жидкость центрифугируют и прозрачную почвенную вытяжку разливают в пробирки, отмечают уровень и стерилизуют в аппарате Коха, после чего восстанавливают первоначальный объем дистиллированной водой.

Стандартные растворы витаминов должны содержать их оптимальную для дрожжей концентрацию (мкг/мл): инозит — 5,0, биотин — 0,0001, пантотеновая кислота — 0,25, тиамин (витамин Bi) — 1,0, пи- ридоксин (витамин Вб) — 0,25, никотиновая кислота (витамин РР) — 0,5.

Сначала готовят исходные растворы витаминов на стерильной дистиллированной воде (10 мл) в стерильных пробирках.

Стандартные растворы витаминов готовят из исходных путем соответствующего их разбавления стерильной дистиллированной водой при соблюдении стерильных условий. Минусовые смеси витаминов готовят из исходных растворов путем смешивания отдельных объемов всех витаминов без одного определяемого (табл. 4).

Опыты по определению витаминов проводят на глюкозо-минеральной среде Ридер следующего состава (г/л): (NH4)2S04 — 3,0, MgS04 — 0,7, NaCl — 0,5, KH2P04— 1,0, КгНР04 — 0,1, глюкоза — 20,0. Если для приготовления среды используют дистиллированную воду, то в нее добавляют смесь микроэлементов. Для приготовления агаризованной среды используют водопроводную воду и агар-агар, не содержащий примесей. Глюкозу освобождают от примесей витаминов. Для этого готовят 20%-ный раствор, к которому добавляют 5% активированного^ угля и встряхивают в течение получаса. Затем фильтруют через бумажный складчатый фильтр. Среду стерилизуют при 0,25 атм 15 мин.

Рост вокруг дисков отмечают в миллиметрах ширины зоны сти-

Составление витаминных смесей

Вита

минные

смеси

Концентрации витаминов в исходных растворах, мкг/мл

Исходные растворы витаминов, мл

Общий объем витаминных растворов, мм

Объем

воды

(до 2С мл)

инозит

биотин

пантотено вая к-та

в4

вв

рр

1

5000

0,4

0,12

0,2

0,1

0,2

1,02

18,98

2

01

0,2

0,12

0,2

0,1

0,2

0,82

19,18

3

500

0,2

0,4

0,2

0,1

0,2

1,1

18,9

4

1000

0,2

0,4

0,12

0,1

0,2

1,02

18,98

/>5

500

0,2

0,4

0,12

0,2

0,2

1,12

18,88

6

500

0,2

0,4

0,12

0,2

0,1

1,02

18,98

муляции. Положительным контролем является рост тест-культуры вокруг диска с дрожжевым автолизатом.

Отрицательным — рост вокруг диска с дистиллированной водой. Интенсивность роста вокруг дисков с почвенной вытяжкой сравнивают с интенсивностью роста вокруг дисков, смоченных стандартным раствором определяемого витамина. Результаты опытов оформляют в таблицу (табл. 5).

Таблица 5

Определение витаминов в почве

Чашка

Петри,

Варианты (среда Ридер без определяемого витамина)

Индикаторная культура

почвенная

вытяжка

Рост вок автолизат

руг дисков

раствор определяемого витамина

дистилли

рованная

вода

1

ИНОЗИТ

Saccharomyces carlsber-

gensis S120D

2

биотин

Zygosaccharomyces bispo-

rus Z6D

3

пантотеновая

Saccharomyces cerevisiae

кислота

(ленинградская раса)

4

тиамин

Pi chi a fermentans

5

пиридоксин

Debaryomyces disporus

D2D

6

никотиновая

Zygosaccharomyces mar-

кислота

xianus Z—734

<< | >>
Источник: И. П. БАБЬЕВА, Г. М. ЗЕНОВА. Биология почв. 1983

Еще по теме ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИТАМИНОВ В ПОЧВЕ-С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДРОЖЖЕЙ КАК ИНДИКАТОРОВ:

  1. Индикаторы дефицита или избытка химических элементов в почве
  2.   МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНОВ  
  3. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ АЗОТНЫХ УДОБРЕНИЙ УРОЖАЕМ И ИХ ПРЕВРАЩЕНИЕ В ПОЧВЕ [38]
  4.   Определение витамина в биологических жидкостях и тканях.  
  5. Растительный покров болот как индикатор генезиса, строения и глубины торфяных отложений
  6.   Определение витамина С в плазме крови.  
  7. Определение витаминов, общие свойства, классификация,подготовка растений к анализу
  8. Определение обменного калия в почве.
  9. 2.4. Определение подвижных форм фосфорав почве
  10. Определение соединений азота в почве, воде и кормах
  11. Определение тяжелых металлов в почве, воде и кормах
  12. Определение содержания питательных веществ в почве
  13. 2.3. Определение содержания нитратов в почве по Грандваль- Ляжу
  14.   Определение витамина Е в сыворотке крови (см. с. 195). Определение церулоплазмина в сыворотке крови.  
  15.   ОЦЕНКА КАЧЕСТВА БЕЛКОВО-ВИТАМИННО-МИНЕРАЛЬНЫХ И АМИДО-ВИТАМИННО-МИНЕРАЛЬНЫХ ДОБАВОК  
  16. Дрожжи
  17.   Определение натрия и калия в биологических жидкостях с использованием ионоселективных анализаторов.