<<
>>

Изучение ассимилятивных свойств грибов рода Malassezia по М. Crespo [58].

Ассимиляцию источников липидов изучали при посеве культур на среду для изучения ассимиляционных свойств дрожжевых грибов (Yeast nitrogen base, Himedia, Индия). В агаровой пластине застывшей среды делали лунки

о

диаметром 1 см, куда вносили соответствующие субстраты в объеме 0,3 см - Твин-40, Твин-80 (производства Merk, Германия).

По окончании культивирования отмечали наличие роста грибных колоний вокруг лунок, что свидетельствовало о способности изучаемой культуры гриба ассимилировать соответствующее вещество.

Определение концентрации клеток в суспензиях культур грибов проводили путем подсчета грибных клеток в счетной камере Горяева [3].

Определение жизнеспособности грибных клеток. Готовили серийные разведения суспензии культур грибов в физиологическом растворе

12 3

1:10" , 1:10" , 1:10" ... и т.д. в зависимости от концентрации грибных клеток. Затем делали высев суспензии культуры на питательные среды в чашках

Л

Петри в объеме 0,5 см . Для посева брали по 4 пары чашек. После культивирования проводили количественный учет выросших грибных колоний. Жизнеспособность грибных клеток определяли по формуле:

C=(K/V0)x, где К - степень разведения, V0- объем посевной дозы, х - среднее арифметическое сумм колоний, выросших на парных чашках. 2.1.13. Изучение вирулентных свойств грибов рода Malassezia. Определение LD50 культур грибов.

Культуры для заражения выращивали в пробирках на среде Барфатини при 37°С в течение 7 сут. По окончании культивирования готовили суспензии дрожжевых клеток в физиологическом растворе. Концентрацию дрожжевых клеток в полученных суспензиях определяли подсчетом в камере Горяе- ва. Из исходной суспензии каждого штамма готовили ряд разведений с кон-

¦j -1 о

центрацией дрожжевых клеток 200 млн/см , 500 млн/см , 1 млрд/см , 2

л о «5

млрд/см , 3 млрд/см , 4 млрд/см . Полученные разведения вводили животным внутрибрюшинно, в объеме 0,5 см . Животным контрольной группы в качестве плацебо внутрибрюшинно вводили физиологический раствор.

При проведении опыта были соблюдены стандартные условия содержания, кормления и ухода для всех групп мышей.

Клинические наблюдения за животными проводились ежедневно, при этом фиксировали клиническое состояние и наличие падежа. Павшие мыши подвергались патологоанатомическому и микологическому исследованию. Для микологического исследования отбирали патматериал из кожных поражений, паренхиматозных органов, лимфоузлов и кишечника. Микологический анализ включал микроскопию патматериала и его посев на питательные среды: модифицированный агар Диксона, среду Барфатини с хлорамфенико- лом (OXOID), сусло-агар, сусло-агар с селективной добавкой Dermasel (цик- логексимид и хлорамфеникол) (OXOID). Культивирование проводилось при

температуре 37°С в течении 7-10 сут. При выделении из патматериала культуры гриба проводили ее идентификацию и сравнение с исходной культурой, использованной для заражения. Срок наблюдения за подопытными животными составил 25 сут.

По окончании опыта для оценки вирулентности культур грибов вычисляли показатель LD50 по методу Кербера в модификации Ашмарина (Методическое руководство по лабораторной оценке качества бактерийных и вирусных препаратов. М, Гос. Контрольный институт медицинских биологических препаратов им. JI.A. Тарасевича, 1972).

Определение вирулентности культур грибов методом накожного заражения проводили на беспородных собаках в возрасте 1-3 года, на момент проведения эксперимента клинически здоровых. Между лопатками выстригали и выбривали участок кожи площадью 5x5 см, обрабатывали 96° этанолом, скарифицировали скальпелем до появления гиперемии, не допуская травмирования кожного покрова. Взвеси грибных культур в физиологическом растворе наносили пипеткой на подготовленные участки кожи, втирали шпателем. Животным контрольной группы в качестве плацебо наносили физиологический раствор. Наблюдения за животными проводились ежедневно, включали общий клинический осмотр, оценку клинических изменений в очагах заражения, отбор патологического материала из очагов заражения для последующего микологического исследования. Наблюдения за животными продолжались вплоть до исчезновения клинических признаков.

<< | >>
Источник: Ершов Петр Петрович. Этиологическая значимость дрожжевых грибов рода Malassezia при кожных заболеваниях животных. Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Москва - 2008.

Еще по теме Изучение ассимилятивных свойств грибов рода Malassezia по М. Crespo [58].:

  1. Изучение ферментативных свойств грибов рода Malassezia.
  2. 2.2.1.2. Изучение частоты встречаемости и плотности популяции грибов рода Malassezia в слуховом канале клинически здоровых животных
  3. 2.2.1.3. Изучение частоты встречаемости и плотности популяции грибов рода Malassezia в слуховом канале животных с проявлениями отитов
  4. Видовая идентификация грибов рода Malassezia.
  5. 1.4. Питательные потребности грибов рода Malassezia и условия для их культивирования
  6. 1.5.1. Видовая идентификация и биологические особенности грибов рода Malassezia
  7. 2.2.1.1. Сравнительная оценка методов выявления грибов рода Malassezia на покровных тканях животных
  8. Ершов Петр Петрович. Этиологическая значимость дрожжевых грибов рода Malassezia при кожных заболеваниях животных. Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Москва - 2008,
  9. 1.1. Общая характеристика рода Malassezia Baillon
  10. 1.3. Грибы рода Malassezia как возбудители инфекционных заболеваний животных.
  11. 1.2. Грибы рода Malassezia как представители нормальной микобиоты кожного покрова животных.
  12. 2.2.2.1. Изучение распространенности и этиологической структуры Malassezia-инфекций среди собак и кошек
  13. 2.2.2. Изучение клинико-эиизоотологических особенностей Malassezia- инфекций домашних животных в Московском регионе
  14. 2.2.3.2. Изучение цитоморфологических свойств клинических изолятов М. pachydermatis
  15. Изучение аллергенных и раздражающих свойств. 
  16. Изучение эмбриотоксических и тератогенных свойств. 
  17. Изучение культуральных свойств выделенного патологического материала.
  18. 2.2.1. Разработка алгоритма диагностики Malassezia-инфекций животных.
  19. 6-4* Наследуется не свойство, а разнообразие свойств
  20. 1.3.2. Клинические формы Malassezia-инфекций животных